| 本论文的创新性工作 | 第1-4页 |
| 中文摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 缩略词表 | 第7-12页 |
| 第一部分 文献综述及选题目的和意义 | 第12-22页 |
| 第一章 疱疹病毒UL29基因及其编码蛋白的研究进展 | 第12-22页 |
| 1.疱疹病毒概述 | 第12页 |
| 2.鸭瘟简介 | 第12-15页 |
| ·DPV病原学概述 | 第12-14页 |
| ·DPV流行病学 | 第14页 |
| ·DPV诊断方法 | 第14-15页 |
| 3.DPV分子生物学概述 | 第15-18页 |
| ·DPV病毒粒子的形态特征 | 第15页 |
| ·DPV基因组特征 | 第15-16页 |
| ·病毒基因的转录 | 第16-17页 |
| ·病毒的装配和释放 | 第17页 |
| ·病毒表达的蛋白质 | 第17-18页 |
| 4.疱疹病毒UL29基因研究进展 | 第18-21页 |
| ·疱疹病毒UL29基因及其编码蛋白的特性 | 第18-19页 |
| ·UL29基因序列的特点 | 第18页 |
| ·UL29基因氨基酸序列的特点 | 第18页 |
| ·UL29蛋白的功能 | 第18-19页 |
| ·UL29基因蛋白的作用 | 第19-20页 |
| ·UL29蛋白核定位信号区 | 第19页 |
| ·UL29蛋白核定位 | 第19页 |
| ·UL29核定位所需的蛋白 | 第19-20页 |
| ·UL29蛋白参与病毒DNA复制 | 第20页 |
| ·UL29蛋白与其他蛋白的相互作用 | 第20-21页 |
| ·UL29蛋白与UL9蛋白作用 | 第20页 |
| ·ICP8蛋白与UL5、UL8、UL52蛋白的作用 | 第20-21页 |
| 5.展望 | 第21页 |
| 6.选题目的和意义 | 第21-22页 |
| 第二部分 试验研究 | 第22-79页 |
| 第二章 鸭瘟病毒UL29基因克隆及生物信息学分析 | 第22-39页 |
| 1 材料与方法 | 第22-25页 |
| ·实验材料 | 第22-23页 |
| ·菌株/毒株/载体 | 第22页 |
| ·实验动物 | 第22页 |
| ·主要试剂及其配制 | 第22-23页 |
| ·主要使用的信息分析软件 | 第23页 |
| ·主要仪器试剂 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-25页 |
| ·基因比对 | 第23页 |
| ·病毒的增殖和病毒基因组DNA的提取 | 第23-24页 |
| ·DPV UL29基因引物设计 | 第24页 |
| ·DPV UL29基因扩增、T克隆及序列测定 | 第24页 |
| ·DPV UL29基因生物信息学分析 | 第24-25页 |
| 2 结果 | 第25-35页 |
| ·DPV UL29基因的初步判定 | 第25-26页 |
| ·DPV UL29基因的克隆、测序 | 第26页 |
| ·UL29基因的生物信息学分析 | 第26-35页 |
| ·UL29蛋白序列分析 | 第26-27页 |
| ·UL29蛋白质组分分析 | 第27页 |
| ·同源性分析 | 第27-28页 |
| ·进化树分析 | 第28-30页 |
| ·跨膜区预测结果 | 第30页 |
| ·磷酸化预测结果 | 第30-31页 |
| ·抗原性分析结果 | 第31页 |
| ·N-糖基化位点预测结果 | 第31-32页 |
| ·信号肽预测结果 | 第32-33页 |
| ·疏水性预测结果 | 第33页 |
| ·二级结构分析 | 第33-34页 |
| ·三级结构分析 | 第34-35页 |
| ·细胞定位分析 | 第35页 |
| 3 讨论 | 第35-39页 |
| ·序列的初步分析 | 第35-36页 |
| ·ORF3585编码肽链的基本性质 | 第36页 |
| ·DPV UL29蛋白的结构和功能预测 | 第36-39页 |
| 第三章 鸭瘟病毒UL29基因的原核表达体系构建及其多克隆抗体制备 | 第39-56页 |
| 1 材料与方法 | 第39-48页 |
| ·实验材料 | 第39-41页 |
| ·菌株/毒株/载体/实验动物 | 第39页 |
| ·主要试剂及其配制 | 第39-41页 |
| ·主要仪器设备 | 第41页 |
| ·主要试剂 | 第41页 |
| ·实验方法 | 第41-48页 |
| ·UL29基因的亚克隆 | 第41-44页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第44-45页 |
| ·UL29表达蛋白的纯化 | 第45-46页 |
| ·多克隆抗体制备及效价检测 | 第46-47页 |
| ·抗体IgG粗提和纯化 | 第47-48页 |
| ·免疫兔血清的Western-Blot检测 | 第48页 |
| 2 实验结果 | 第48-53页 |
| ·重组表达质粒pET32-UL29构建 | 第48-49页 |
| ·重组蛋白的诱导表达及条件优化 | 第49-51页 |
| ·琼脂糖扩散试验结果 | 第51页 |
| ·抗体IgG粗提和纯化 | 第51-52页 |
| ·免疫印迹 | 第52-53页 |
| 3 讨论 | 第53-56页 |
| ·外源基因融合表达的意义 | 第53-54页 |
| ·UL29基因的引物设计 | 第54页 |
| ·诱导表达 | 第54-55页 |
| ·包涵体的形成 | 第55页 |
| ·抗血清的制备 | 第55-56页 |
| 第四章 鸭瘟病毒UL29基因产物的细胞定位及其转录表达时相 | 第56-79页 |
| 1 材料与方法 | 第56-62页 |
| ·实验材料 | 第56-57页 |
| ·菌株/毒株/实验动物 | 第56页 |
| ·主要试剂及其配制 | 第56-57页 |
| ·主要仪器设备 | 第57页 |
| ·试验方法 | 第57-62页 |
| ·鸭胚成纤维细胞的培养和病毒接种 | 第57页 |
| ·间接免疫荧光 | 第57-58页 |
| ·转录时相 | 第58-61页 |
| ·表达时相 | 第61-62页 |
| 2 实验结果 | 第62-73页 |
| ·细胞定位 | 第62-66页 |
| ·间接免疫荧光检测DPV UL29基因产物 | 第62-63页 |
| ·特异性实验 | 第63页 |
| ·DPV UL29基因的细胞定位动态监测 | 第63-66页 |
| ·转录时相 | 第66-72页 |
| ·引物验证 | 第66页 |
| ·β-actin内参引物检测样品 | 第66-68页 |
| ·UL29设计引物检测样品 | 第68-69页 |
| ·数据统计分析 | 第69-72页 |
| ·表达时相 | 第72-73页 |
| ·细胞蛋白的提取及SDS-PAGE检测 | 第72页 |
| ·DPV UL29基因产物在细胞中的表达时相 | 第72-73页 |
| 3 讨论 | 第73-79页 |
| ·细胞定位 | 第73-75页 |
| ·蛋白定位的研究方法 | 第73页 |
| ·病毒UL29感染鸭胚成纤维细胞的定位分析 | 第73-74页 |
| ·关于DPV UL29在鸭胚成纤维细胞定位的时相分析 | 第74页 |
| ·DPV UL29鸭胚成纤维细胞定位与病毒增殖相关性的初步探讨 | 第74-75页 |
| ·转录时相 | 第75-76页 |
| ·荧光实时定量PCR对病毒在机体内增殖分布规律研究的优越性 | 第75-76页 |
| ·病毒UL29基因转录时相分析 | 第76页 |
| ·关于Western-Blot表达时相的分析 | 第76-79页 |
| ·细胞总蛋白的提取 | 第76-77页 |
| ·合适抗体及抗体浓度的选择 | 第77页 |
| ·病毒UL29基因表达时相分析 | 第77-79页 |
| 第三部分 结论 | 第79-80页 |
| 第四部分 参考文献 | 第80-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 作者简介 | 第88页 |
