| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-39页 |
| ·前言 | 第13-14页 |
| ·抗菌肽研究进展 | 第14-30页 |
| ·来源及种类 | 第14-23页 |
| ·鱼类抗菌肽的抗菌机制 | 第23-24页 |
| ·hepcidin 研究进展 | 第24-28页 |
| ·抗菌肽的应用前景 | 第28-30页 |
| ·类胰岛素样生长因子研究进展 | 第30-38页 |
| ·IGF- II 研究进展 | 第30-32页 |
| ·IGF- I 研究进展 | 第32-35页 |
| ·鱼类类胰岛素样生长因子研究进展 | 第35-36页 |
| ·鱼类IGF-Ⅰ的生理功能 | 第36-37页 |
| ·鱼类类胰岛素样生长因子研究展望 | 第37-38页 |
| 本论文的研究目的和意义 | 第38-39页 |
| 2 大菱鲆IGF-Ⅰ基因克隆及表达分析 | 第39-55页 |
| ·引言 | 第39-40页 |
| ·材料和方法 | 第40-46页 |
| ·实验材料 | 第40页 |
| ·菌株与质粒 | 第40页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第40-41页 |
| ·实验方法 | 第41-46页 |
| ·总RNA 的提取（Trizol 法） | 第41页 |
| ·反转录cDNA 第一链的合成 | 第41-42页 |
| ·引物设计和cDNA 的扩增 | 第42页 |
| ·IGF-Ⅰ基因全长cDNA 的获得 | 第42-44页 |
| ·感受态的制备与转化 | 第44页 |
| ·碱法小量提取质粒DNA | 第44页 |
| ·PCR 检测筛选和序列测定 | 第44-45页 |
| ·核苷酸序列的分析和氨基酸比对 | 第45页 |
| ·荧光实时定量PCR | 第45-46页 |
| ·结果与分析 | 第46-52页 |
| ·IGF-Ⅰ基因cDNA 片断的获得 | 第46页 |
| ·IGF-Ⅰ基因cDNA 片断的序列测定 | 第46页 |
| ·IGF-Ⅰ基因的全长cDNA 序列 | 第46-47页 |
| ·IGF-Ⅰ成熟肽序列分析 | 第47-49页 |
| ·IGF-Ⅰ在不同组织中的表达分析 | 第49-52页 |
| ·大菱鲆IGF-Ⅰ基因在不同组织中的表达分析 | 第49页 |
| ·大菱鲆IGF-Ⅰ基因在不同胚胎发育时期的表达分析 | 第49-50页 |
| ·大菱鲆IGF-Ⅰ基因在温度处理组织中的表达 | 第50-51页 |
| ·大菱鲆IGF-Ⅰ基因在饥饿处理组织中的表达分析 | 第51-52页 |
| ·讨论 | 第52-55页 |
| 3 大菱鲆基因的酵母重组表达研究 | 第55-108页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统简介 | 第55-64页 |
| ·巴斯德毕赤酵母宿主菌株的类型 | 第55-56页 |
| ·巴斯德毕赤酵母载体的选择标志 | 第56-57页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统优点 | 第57页 |
| ·影响外源蛋白在巴斯德毕赤酵母中表达的因素 | 第57-61页 |
| ·启动子的影响 | 第57-58页 |
| ·密码子的偏爱性与tRNA 的丰度 | 第58页 |
| ·外源蛋白自身的理化特点 | 第58页 |
| ·信号肽的影响 | 第58-59页 |
| ·发酵条件的影响 | 第59页 |
| ·基因剂量对表达的影响 | 第59-60页 |
| ·mRNA 5’和3’非翻译区（UTR） | 第60页 |
| ·A+T 组成 | 第60页 |
| ·载体的类型及宿主的表型 | 第60页 |
| ·翻译起始密码子AUG 前后的序列 | 第60-61页 |
| ·产物稳定性 | 第61页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达外源蛋白的研究进展 | 第61-64页 |
| ·大菱鲆Hepcidin 与IGF-Ⅰ融合分泌表达研究 | 第64-81页 |
| ·引言 | 第64-65页 |
| ·材料 | 第65-66页 |
| ·酶和试剂 | 第65页 |
| ·菌株与质粒 | 第65-66页 |
| ·主要仪器 | 第66页 |
| ·实验方法 | 第66-77页 |
| ·培养基及有关溶液的配制 | 第66-67页 |
| ·载体构建 | 第67-71页 |
| ·酵母感受态细胞的制备 | 第71-72页 |
| ·酵母菌的电击转化和阳性转化子的PCR 筛选 | 第72-74页 |
| ·阳性重组转化子多拷贝整合转化子筛选 | 第74页 |
| ·重组产物的诱导表达 | 第74-75页 |
| ·蛋白的纯化 | 第75页 |
| ·Western-blotting 检测融合蛋白 | 第75-76页 |
| ·阳性转化子的时间表达动态 | 第76-77页 |
| ·琼脂扩散法检测重组产物的抗菌活性 | 第77页 |
| ·结果与分析 | 第77-81页 |
| ·HIP 序列扩增及测序 | 第77-78页 |
| ·酵母分泌表达载体的构建 | 第78页 |
| ·融合蛋白 Western-blotting 表达分析 | 第78-79页 |
| ·阳性转化子的表达时间动态 | 第79-80页 |
| ·阳性菌株表达对菌株密度的影响 | 第80-81页 |
| ·大菱鲆Hepcidin 与GFP 融合分泌表达研究 | 第81-89页 |
| ·引言 | 第81页 |
| ·材料与方法 | 第81-83页 |
| ·材料与方法 | 第81-82页 |
| ·pMD-HGP 载体构建 | 第82-83页 |
| ·革兰染色的实验步骤 | 第83-84页 |
| ·结果与分析 | 第84-89页 |
| ·HGP 序列扩增及测序 | 第84-85页 |
| ·酵母分泌表达载体的构建 | 第85页 |
| ·Western-blotting 分析表达的融合蛋白 | 第85-86页 |
| ·阳性转化子的表达时间动态 | 第86-87页 |
| ·阳性酵母菌株荧光检测 | 第87-88页 |
| ·阳性菌株表达对菌株密度的影响 | 第88-89页 |
| ·几种大菱鲆基因分泌表达研究 | 第89-101页 |
| ·大菱鲆hepcidin 分泌表达研究 | 第89-94页 |
| ·材料与方法 | 第89页 |
| ·pMD-HP 载体构建 | 第89-90页 |
| ·HP 序列扩增及测序 | 第90-91页 |
| ·酵母分泌表达载体的构建 | 第91-92页 |
| ·Western-blotting 分析表达的融合蛋 | 第92-93页 |
| ·阳性菌株表达对菌株密度的影响 | 第93-94页 |
| ·大菱鲆IGF-Ⅰ分泌表达研究 | 第94-98页 |
| ·材料与方法 | 第94页 |
| ·pMD-IP 载体构建 | 第94-95页 |
| ·IP 序列扩增及测序 | 第95-96页 |
| ·IP 酵母分泌表达载体的构建 | 第96页 |
| ·Western-blotting 分析表达的融合蛋 | 第96-98页 |
| ·大菱鲆Grim19 分泌表达研究 | 第98-101页 |
| ·材料与方法 | 第98页 |
| ·pMD-GP 载体构建 | 第98-99页 |
| ·GP 序列扩增及测序 | 第99-100页 |
| ·GP 酵母分泌表达载体的构建 | 第100-101页 |
| ·五种酵母胞内融合表达载体的构建 | 第101-105页 |
| ·引言 | 第101页 |
| ·材料与方法 | 第101页 |
| ·五种酵母胞内融合表达载体的构建 | 第101-103页 |
| ·酵母胞内融合表达载体的酶切鉴定 | 第103-104页 |
| ·阳性克隆PCR 鉴定 | 第104-105页 |
| ·讨论 | 第105-108页 |
| 4 细胞表达载体的构建及表达分析 | 第108-113页 |
| ·引言 | 第108-109页 |
| ·材料和方法 | 第109-110页 |
| ·实验材料 | 第109页 |
| ·菌株与质粒 | 第109页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第109页 |
| ·细胞转染 | 第109-110页 |
| ·结果与分析 | 第110-111页 |
| ·五种细胞表达载体酶切鉴定 | 第110页 |
| ·转染细胞的绿色荧光检测 | 第110-111页 |
| ·讨论 | 第111-113页 |
| 参考文献 | 第113-130页 |
| 致谢 | 第130-131页 |
| 个人简历 | 第131-132页 |
| 发表的学术论文 | 第132-133页 |
