| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-41页 |
| ·前言 | 第17页 |
| ·σS 基因表达调控功能的研究 | 第17-22页 |
| ·σ~S 的发现及其主要特征 | 第17-18页 |
| ·受σ~S 调控的基因 | 第18-19页 |
| ·σ~S 识别的启动子区保守序列 | 第19-20页 |
| ·Eσ~S 和Eσ70 识别的启动子的不同特征 | 第20-22页 |
| ·细胞内σ~S 水平的控制 | 第22-32页 |
| ·rpoS 转录的调控 | 第22-24页 |
| ·rpoS 翻译的调控 | 第24-27页 |
| ·σ~S 蛋白水解的调控 | 第27-29页 |
| ·RpoS 活性的调控 | 第29-30页 |
| ·ArcB/ArcA/RssB “三组份”系统与RpoS 的表达和降解 | 第30-32页 |
| ·σ~S 在大肠杆菌和假单胞菌中的调控差异 | 第32-36页 |
| ·在假单胞菌和大肠杆菌中RpoS-依赖的调控 | 第32-33页 |
| ·rpoS 的启动子和转录调控证据 | 第33-36页 |
| ·限制性培养基中RpoS 的全局性调控作用 | 第36-39页 |
| ·立题依据 | 第39-41页 |
| 第二章 施氏假单胞菌A1501 中rpoS 基因突变株和互补株的构建 | 第41-53页 |
| ·材料 | 第41-43页 |
| ·菌株和质粒 | 第41-42页 |
| ·培养基 | 第42-43页 |
| ·酶和化学试剂 | 第43页 |
| ·主要仪器 | 第43页 |
| ·方法 | 第43-47页 |
| ·碱裂解法小量提取细菌质粒 | 第43-44页 |
| ·基因的PCR 扩增 | 第44-45页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第45-46页 |
| ·琼脂糖凝胶中 DNA 片段的回收 | 第46页 |
| ·酶切及连接反应 | 第46页 |
| ·连接产物的转化 | 第46页 |
| ·高效率转化感受态细胞的制备 | 第46-47页 |
| ·大肠杆菌电激转化 | 第47页 |
| ·三亲结合实验 | 第47页 |
| ·结果分析 | 第47-52页 |
| ·rpoS 缺失突变株的构建 | 第47-50页 |
| ·功能互补菌株的构建 | 第50-52页 |
| ·讨论 | 第52-53页 |
| 第三章 rpoS 突变株抗逆及固氮等生理生化表型鉴定 | 第53-64页 |
| ·材料 | 第53-54页 |
| ·菌株和质粒 | 第53页 |
| ·培养基 | 第53-54页 |
| ·酶和化学试剂 | 第54页 |
| ·主要仪器 | 第54页 |
| ·方法 | 第54-57页 |
| ·基因的PCR 扩增 | 第54-55页 |
| ·生长曲线的测定 | 第55页 |
| ·固氮酶活性的测定 | 第55-56页 |
| ·考马斯亮蓝法测定全细胞的蛋白含量 | 第56页 |
| ·逆境胁迫实验 | 第56页 |
| ·biolog 分析野生型与突变株对碳源的利用情况 | 第56-57页 |
| ·结果分析 | 第57-62页 |
| ·P. stutzeri A1501 菌 rpoS 与其它菌中同源基因的进化分析 | 第57页 |
| ·野生型、突变株及功能互补菌株生长曲线的测定 | 第57-58页 |
| ·rpoS 突变对固氮酶活性的影响 | 第58-59页 |
| ·rpoS 基因缺失对盐胁迫耐受性的影响 | 第59-60页 |
| ·多种胁迫条件下rpoS 野生型与突变株的生长状况 | 第60-61页 |
| ·Biolog 分析野生型与突变株对多种碳源的利用情况 | 第61-62页 |
| ·讨论 | 第62-64页 |
| 第四章 RpoS 在一般胁迫反应中的作用机制 | 第64-87页 |
| ·材料 | 第64-67页 |
| ·菌株和质粒 | 第64-65页 |
| ·培养基 | 第65页 |
| ·酶与化学试剂 | 第65页 |
| ·主要仪器 | 第65页 |
| ·常用溶液 | 第65-67页 |
| ·方法 | 第67-76页 |
| ·基因的PCR 扩增 | 第67页 |
| ·细菌基因组RNA 的提取 | 第67-68页 |
| ·RNA 反转录为cDNA | 第68-69页 |
| ·A1501 基因组的提取 | 第69页 |
| ·实时荧光定量PCR 实验 | 第69-71页 |
| ·RpoS 蛋白表达载体的选择与融合载体的构建 | 第71页 |
| ·RpoS 蛋白的诱导表达条件的选择 | 第71页 |
| ·SDS-PAGE 电泳（采用垂直式电泳槽装置） | 第71-72页 |
| ·用2ml Chitin 亲合柱进行蛋白纯化 | 第72-73页 |
| ·DEAE52 阴离子交换层析纯化蛋白 | 第73-74页 |
| ·蛋白的脱盐与浓缩 | 第74页 |
| ·凝胶阻滞实验 | 第74-75页 |
| ·启动子截短实验 | 第75-76页 |
| ·结果与分析 | 第76-85页 |
| ·施氏假单胞菌 A1501 中受 σ~S 调控基因的预测及分析 | 第76页 |
| ·RNA 的提取 | 第76-77页 |
| ·qRT-PCR 分析验证受σ~S 调控的下游基因 | 第77-78页 |
| ·RpoS 表达载体的构建 | 第78-80页 |
| ·RpoS 蛋白的表达 | 第80页 |
| ·RpoS 蛋白的纯化 | 第80-83页 |
| ·凝胶阻滞实验分析基因与蛋白的结合 | 第83-84页 |
| ·启动子截短实验分析蛋白在启动子区的结合部位 | 第84-85页 |
| ·讨论 | 第85-87页 |
| 第五章 结论 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
| 作者简历 | 第100页 |
