| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 第一章 综述 | 第9-24页 |
| ·毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统 | 第9-17页 |
| ·毕赤酵母表达系统的的发展 | 第9页 |
| ·巴斯德毕赤酵母细胞内的甲醇代谢途径 | 第9-11页 |
| ·外源基因在毕赤酵母中的表达 | 第11-17页 |
| ·毕赤酵母发酵过程研究进展 | 第17-20页 |
| ·发酵参数 | 第17-18页 |
| ·毕赤酵母的生长检测和对溶氧及温度的响应 | 第18-19页 |
| ·培养工艺 | 第19-20页 |
| ·胰岛素及其生产 | 第20-22页 |
| ·胰岛素和胰岛素的生物学作用 | 第20-21页 |
| ·人胰岛素的制备 | 第21-22页 |
| ·重组毕赤酵母分泌表达胰岛素 | 第22页 |
| ·课题研究内容 | 第22-24页 |
| ·课题研究背景和意义 | 第22-23页 |
| ·课题内容 | 第23-24页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第24-31页 |
| ·实验材料 | 第24-25页 |
| ·菌种 | 第24页 |
| ·培养基 | 第24页 |
| ·主要试剂 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-27页 |
| ·菌种保藏 | 第25页 |
| ·摇瓶培养 | 第25页 |
| ·发酵罐发酵 | 第25-26页 |
| ·定量PCR | 第26-27页 |
| ·参数检测与分析方法 | 第27-31页 |
| ·细胞死亡率测定 | 第27-28页 |
| ·镜检观察细胞活性 | 第28页 |
| ·细胞光密度测定 | 第28页 |
| ·甲醇浓度测定 | 第28-29页 |
| ·液相色谱法测定目的蛋白PIP浓度 | 第29-30页 |
| ·在线参数检测与控制 | 第30-31页 |
| 第三章 温度对于不同拷贝数重组毕赤酵母生理和PIP表达影响 | 第31-42页 |
| ·摇瓶发酵中温度对不同PIP拷贝数重组毕赤酵母生长的影响 | 第31-32页 |
| ·摇瓶培养中温度对不同PIP拷贝数毕赤酵母表达PIP的影响 | 第32-34页 |
| ·50L罐培养温度对不同多拷贝毕赤酵母生长和PIP表达的影响 | 第34-35页 |
| ·不同PIP拷贝数重组毕赤酵母在诱导期的细胞活性变化 | 第35-37页 |
| ·不同拷贝数重组毕赤酵母关键酶基因转录水平的差异分析 | 第37-41页 |
| ·本章小结 | 第41-42页 |
| 第四章 溶氧对于多拷贝重组毕赤酵母生理和PIP表达影响 | 第42-52页 |
| ·摇瓶发酵中培养基不同装量对多PIP拷贝数毕赤酵母细胞生长的影响 | 第42-44页 |
| ·摇瓶发酵中培养基不同装量对多PIP拷贝数毕赤酵母PIP产量的影响 | 第44-47页 |
| ·不同PIP拷贝数重组毕赤酵母在诱导期的细胞活性变化 | 第47-48页 |
| ·不同拷贝数重组毕赤酵母关键酶基因转录水平的差异分析 | 第48-51页 |
| ·本章小结 | 第51-52页 |
| 第五章 蛋白伴侣PDI过表达对PIP分泌表达影响 | 第52-59页 |
| ·PDI表达载体的构建 | 第52-53页 |
| ·转化毕赤酵母和转化子的验证结果 | 第53-54页 |
| ·PDI过表达重组菌A2p的发酵培养结果 | 第54-55页 |
| ·PDI过表达重组A2p细胞内ROS分析 | 第55-56页 |
| ·PDI过表达重组菌细胞存活率(Viability)分析 | 第56-59页 |
| 第六章 结论与展望 | 第59-61页 |
| ·结论 | 第59-60页 |
| ·展望 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 攻读硕士期间撰写论文 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
