| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第10-12页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-19页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征 | 第12页 |
| ·PRRS的危害及流行病学特点 | 第12页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征病毒的特性 | 第12-13页 |
| ·猪感染PRRSV后的免疫学反应 | 第13-14页 |
| ·干扰素刺激基因 | 第14-19页 |
| ·干扰素介导并发挥作用的JAK-STAT信号转导通路 | 第15-16页 |
| ·干扰素诱导的几种重要的干扰素刺激基因 | 第16-19页 |
| ·双链RNA依赖性蛋白激酶(PKR) | 第17页 |
| ·2’,5’-寡聚腺苷酸合成酶(OAS) | 第17页 |
| ·粘病毒抗性基因(Mx) | 第17页 |
| ·干扰素刺激基因20(ISG20) | 第17-19页 |
| 第2章 研究目的与意义 | 第19-20页 |
| 第3章 材料与方法 | 第20-33页 |
| ·试验材料 | 第20-24页 |
| ·毒株、细胞与菌株 | 第20页 |
| ·载体与质粒 | 第20-21页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第21-22页 |
| ·培养基与抗生素及其配制 | 第22页 |
| ·抗体 | 第22页 |
| ·主要缓冲液与相关试剂及其配制 | 第22-24页 |
| ·分子生物学分析软件 | 第24页 |
| ·试验方法 | 第24-33页 |
| ·PRRSV的增殖 | 第24页 |
| ·限制性内切酶酶切反应 | 第24页 |
| ·PCR产物或酶切产物的电泳检测 | 第24页 |
| ·PCR产物或酶切产物的回收与纯化 | 第24-25页 |
| ·外源DNA片段与目的载体的连接反应 | 第25页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第25页 |
| ·连接产物的转化 | 第25-26页 |
| ·质粒的制备与鉴定 | 第26-27页 |
| ·质粒转染(脂质体介导转染法) | 第27-28页 |
| ·Western blot检测目的蛋白在真核细胞中的表达 | 第28-29页 |
| ·半数细胞培养物感染量(TCID_(50))的测定 | 第29页 |
| ·DAPI染色 | 第29-30页 |
| ·细胞、感染病毒的细胞样品总RNA的提取 | 第30页 |
| ·cDNA的合成 | 第30-31页 |
| ·SYBR Green Ⅰ实时定量PCR检测细胞中ISG20的mRNA含量 | 第31页 |
| ·相对mRNA表达水平的计算 | 第31页 |
| ·绝对荧光定量检测SJPL细胞中PRRSV的含量 | 第31-32页 |
| ·猪ISG20二级结构及三级结构预测 | 第32页 |
| ·统计学方法 | 第32-33页 |
| 第4章 结果和分析 | 第33-45页 |
| ·猪ISG20的克隆、序列分析及进化树的绘制 | 第33-38页 |
| ·野生型猪ISG20基因的RT-PCR扩增与克隆 | 第33-34页 |
| ·突变型猪ISG20基因的RT-PCR扩增与克隆 | 第34-36页 |
| ·猪ISG20的序列分析 | 第36-38页 |
| ·系统发育树分析 | 第38页 |
| ·猪ISG20结构预测与功能分析 | 第38-40页 |
| ·二级结构预测 | 第38-39页 |
| ·三级结构预测 | 第39-40页 |
| ·猪ISG20的真核表达及其亚细胞定位分析 | 第40-42页 |
| ·猪ISG20与EGFP融合的真核表达质粒构建 | 第40-41页 |
| ·猪ISG20的真核表达及Western blot鉴定分析 | 第41页 |
| ·猪ISG20的亚细胞定位分析 | 第41-42页 |
| ·猪ISG20对PRRSV增殖的影响 | 第42-43页 |
| ·Real-Time PCR检测猪ISG20对PRRSV增殖的影响 | 第42页 |
| ·TCID_(50)检测猪ISG20对PRRSV增殖的影响 | 第42-43页 |
| ·PRRSV感染对猪ISG20基因表达的影响 | 第43-45页 |
| 第5章 讨论与结论 | 第45-49页 |
| ·讨论 | 第45-48页 |
| ·猪ISG20的克隆、序列分析及其进化树的绘制 | 第45-46页 |
| ·猪ISG20结构预测与功能分析 | 第46页 |
| ·猪ISG20的真核表达及其亚细胞定位分析 | 第46-47页 |
| ·猪ISG20对PRRSV增殖的影响 | 第47-48页 |
| ·PRRSV感染对猪ISG20基因表达的影响 | 第48页 |
| ·结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
| 致谢 | 第54页 |
