| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-33页 |
| ·氧化葡萄糖酸杆菌 | 第13-16页 |
| ·氧化葡萄糖酸杆菌的基本特性 | 第13页 |
| ·氧化葡萄糖酸杆菌的基因组学特征 | 第13-14页 |
| ·氧化葡萄糖酸杆菌的呼吸链特征 | 第14页 |
| ·氧化葡萄糖酸杆菌的代谢特征 | 第14-16页 |
| ·氧化葡萄糖酸杆菌在工业中的应用 | 第16-19页 |
| ·维生素C前体的生产 | 第17页 |
| ·葡萄糖酸及酮基葡萄糖酸的合成 | 第17-18页 |
| ·米格列醇前体的合成 | 第18-19页 |
| ·1,3-二羟基丙酮的合成 | 第19页 |
| ·二羟基丙酮的制备方法 | 第19-28页 |
| ·二羟基丙酮的性质及应用 | 第19-20页 |
| ·二羟基丙酮的制备方法 | 第20-21页 |
| ·甘油在氧化葡萄糖酸杆菌细胞内的代谢 | 第21-23页 |
| ·应用氧化葡萄糖酸杆菌生产二羟基丙酮的方式 | 第23-25页 |
| ·氧化葡萄糖酸杆菌生产二羟丙酮存在的主要问题 | 第25-27页 |
| ·基因工程技术在氧化葡萄糖酸杆菌中的应用 | 第27-28页 |
| ·透明颤菌血红蛋白 | 第28-32页 |
| ·透明颤菌血红蛋白的结构和生理功能 | 第28-29页 |
| ·透明颤菌血红蛋白的作用机理 | 第29-30页 |
| ·透明颤菌血红蛋白的基因结构及表达调控 | 第30-31页 |
| ·透明颤菌血红蛋白的应用 | 第31-32页 |
| ·本课题研究的背景及意义 | 第32-33页 |
| 第二章 透明颤菌血红蛋白在氧化葡萄糖酸酸杆菌的克隆与表达 | 第33-50页 |
| ·前言 | 第33页 |
| ·材料与方法 | 第33-40页 |
| ·实验材料 | 第33-36页 |
| ·实验方法 | 第36-38页 |
| ·基因的PCR扩增 | 第36页 |
| ·静息细胞制备 | 第36页 |
| ·质粒抽提、基因组提取及DNA片段凝胶回收 | 第36页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第36-37页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第37页 |
| ·大肠杆菌转化子的快速鉴定 | 第37页 |
| ·氧化葡萄糖酸杆菌的接合转化 | 第37页 |
| ·透明颤菌血红蛋白的诱导表达及分离纯化 | 第37-38页 |
| ·分析方法 | 第38-40页 |
| ·菌体浓度的测定 | 第38页 |
| ·一氧化碳差光光谱法检测VHb | 第38-39页 |
| ·甘油和DHA的测定方法 | 第39-40页 |
| ·结果与分析 | 第40-48页 |
| ·VHb在E.coli BL21(DE3)中的表达 | 第40-43页 |
| ·VHb基因的克隆及重组载体的构建 | 第40-41页 |
| ·VHb在E.coli BL21(DE3)的诱导表达及分离纯化 | 第41页 |
| ·VHb的一氧化碳差光光谱法分析 | 第41-42页 |
| ·VHb对氧化葡萄糖酸杆菌生长及催化的影响 | 第42-43页 |
| ·VHb在氧化葡萄糖酸杆菌中的表达 | 第43-48页 |
| ·VHb基因的克隆 | 第45-46页 |
| ·强启动子的筛选 | 第46-47页 |
| ·VHb在氧化葡萄糖酸杆菌中的表达 | 第47-48页 |
| ·VHb在重组氧化葡萄糖酸杆菌细胞内的表达规律 | 第48页 |
| ·小结 | 第48-50页 |
| 第三章 透明颤菌血红蛋白对氧化葡萄糖酸杆菌生长及催化活性的影响 | 第50-65页 |
| ·前言 | 第50页 |
| ·材料与方法 | 第50-53页 |
| ·实验材料 | 第50-51页 |
| ·实验方法 | 第51-52页 |
| ·种子培养 | 第51页 |
| ·三角瓶内菌体生长及细胞催化活性的比较 | 第51页 |
| ·发酵罐内菌体生长及细胞催化活性的比较 | 第51页 |
| ·氧化葡萄糖酸杆菌膜组分的提取方法 | 第51页 |
| ·静息细胞催化反应的动力学测定 | 第51-52页 |
| ·分析方法 | 第52-53页 |
| ·菌体浓度测定方法 | 第52页 |
| ·甘油及二羟基丙酮的测定方法 | 第52页 |
| ·甘油脱氢酶酶活测定方法 | 第52页 |
| ·蛋白质浓度的测定方法 | 第52-53页 |
| ·摄氧率的测定方法 | 第53页 |
| ·质粒稳定性的测定 | 第53页 |
| ·结果与讨论 | 第53-64页 |
| ·VHb对细胞生长及催化活性影响的初步测定 | 第53-57页 |
| ·VHb对细胞生长的影响 | 第54-55页 |
| ·VHb对二羟丙酮产量的影响 | 第55-57页 |
| ·VHb对氧化葡萄糖酸杆菌摄氧率的影响 | 第57页 |
| ·VHb表达质粒的稳定性 | 第57页 |
| ·生物反应器中菌体生长及二羟丙酮产量的比较 | 第57-62页 |
| ·VHb在氧化葡萄糖酸杆菌静息细胞催化中的作用 | 第58-60页 |
| ·VHb在氧化葡萄糖酸杆菌发酵体系中的作用 | 第60-62页 |
| ·VHb提高氧化葡萄糖酸杆菌催化活性机制的初步探讨 | 第62-64页 |
| ·VHb对氧化葡萄糖酸杆菌甘油脱氢酶表达量的影响 | 第62页 |
| ·VHb对细胞催化动力学的影响 | 第62-64页 |
| ·小结 | 第64-65页 |
| 第四章 过量表达甘油脱氢酶提高二羟基丙酮产量的研究 | 第65-90页 |
| ·前言 | 第65页 |
| ·材料与方法 | 第65-71页 |
| ·实验材料 | 第65-66页 |
| ·实验方法 | 第66-71页 |
| ·质粒提取、DNA片段回收、基因组提取方法 | 第66页 |
| ·膜组分的提取方法 | 第66-67页 |
| ·总RNA的提取方法 | 第67页 |
| ·cDNA的合成方法 | 第67页 |
| ·荧光实时定量PCR | 第67页 |
| ·甘油脱氢酶基因的克隆及重组质粒的构建 | 第67-70页 |
| ·氧化葡萄糖酸杆菌电转化感受态的制备 | 第70页 |
| ·氧化葡萄糖酸杆菌的电击转化 | 第70页 |
| ·静息细胞催化甘油生产二羟基丙酮 | 第70-71页 |
| ·静息细胞的多批次反应 | 第71页 |
| ·分析方法 | 第71页 |
| ·菌体密度测量方法 | 第71页 |
| ·甘油脱氢酶活性及蛋白质浓度测定方法 | 第71页 |
| ·甘油和二羟基丙酮测量方法 | 第71页 |
| ·质粒稳定性测定方法 | 第71页 |
| ·细胞生理状态的流式细胞仪分析 | 第71页 |
| ·结果与讨论 | 第71-89页 |
| ·重组质粒的构建 | 第71-74页 |
| ·由tufB启动子控制的重组甘油脱氢酶表达载体的构建 | 第71-73页 |
| ·含自身启动子的重组甘油脱氢酶表达载体的构建 | 第73-74页 |
| ·重组氧化葡萄糖酸杆菌的酶活及催化 | 第74-76页 |
| ·重组氧化葡萄糖酸杆菌甘油脱氢酶的酶活比较 | 第74页 |
| ·重组氧化葡萄糖酸杆菌生长的比较 | 第74-75页 |
| ·重组氧化葡萄糖酸杆菌催化甘油生成二羟基丙酮的比较 | 第75-76页 |
| ·甘油脱氢酶在氧化葡萄糖酸杆菌突变菌株的过量表达 | 第76-78页 |
| ·各基因缺失菌株催化活性的比较 | 第76-77页 |
| ·不同菌株的甘油脱氢酶酶活比较 | 第77-78页 |
| ·实时荧光定量PCR检测甘油脱氢酶的表达 | 第78-80页 |
| ·cDNA的合成 | 第78页 |
| ·溶解曲线 | 第78-79页 |
| ·16S rRNA和甘油脱氢酶基因标准曲线的制作 | 第79页 |
| ·荧光定量PCR扩增曲线 | 第79-80页 |
| ·甘油脱氢酶转录水平的比较 | 第80页 |
| ·氧化葡萄糖酸杆菌不同菌株催化活力的比较 | 第80-82页 |
| ·生物反应器内催化比较实验 | 第82-89页 |
| ·M5AM/GDH与M5/pBBR菌株催化活性的比较 | 第82-84页 |
| ·M5AM/GDH菌株在高浓度底物存在时的催化活性 | 第84-85页 |
| ·高浓度静息细胞的催化反应 | 第85-87页 |
| ·氧化葡萄糖酸杆菌的批次催化反应 | 第87-89页 |
| ·小结 | 第89-90页 |
| 第五章 透明颤菌血红蛋白和甘油脱氢酶共表达对氧化葡萄糖酸杆菌催化甘油生成二羟丙酮的影响 | 第90-98页 |
| ·前言 | 第90页 |
| ·材料与方法 | 第90-92页 |
| ·实验材料 | 第90-91页 |
| ·实验方法 | 第91-92页 |
| ·基因操作方法 | 第91页 |
| ·透明颤菌血红蛋白和甘油脱氢酶共表达载体的构建 | 第91-92页 |
| ·膜组分的制备方法 | 第92页 |
| ·静息细胞催化方法 | 第92页 |
| ·分析方法 | 第92页 |
| ·菌体密度测定方法 | 第92页 |
| ·甘油脱氢酶活性测定方法 | 第92页 |
| ·透明颤菌血红蛋白的检测方法 | 第92页 |
| ·结果与讨论 | 第92-97页 |
| ·重组质粒的构建 | 第92-94页 |
| ·重组氧化葡萄糖酸杆菌透明颤菌血红蛋白的表达量 | 第94页 |
| ·重组氧化葡萄糖酸杆菌甘油脱氢酶的表达量 | 第94-95页 |
| ·氧化葡萄糖酸杆菌TVTG菌株的生长 | 第95-96页 |
| ·氧化葡萄糖酸杆菌TVTG菌株的催化活性 | 第96页 |
| ·氧化葡萄糖酸杆菌TVTG菌株生物反应器内催化甘油 | 第96-97页 |
| ·小结 | 第97-98页 |
| 第六章 结论与展望 | 第98-100页 |
| ·结论 | 第98-99页 |
| ·展望 | 第99-100页 |
| 参考文献 | 第100-111页 |
| 致谢 | 第111-112页 |
| 博士期间撰写发表的论文与专利 | 第112页 |
