| 高频词对照表 | 第1-10页 |
| 摘要 | 第10-13页 |
| ABSTRACT | 第13-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-52页 |
| 1 动物细胞体外培养技术 | 第17页 |
| ·细胞体外培养技术的发展历程 | 第17页 |
| ·体外细胞建系的方法 | 第17页 |
| 2 前脂肪细胞的培养与分化 | 第17-24页 |
| ·前脂肪细胞理论的形成 | 第18页 |
| ·前脂肪细胞的培养 | 第18-19页 |
| ·前脂肪细胞的诱导分化 | 第19-24页 |
| ·诱导分化常用细胞系 | 第19-21页 |
| ·前脂肪细胞分化过程及细胞形态 | 第21页 |
| ·前脂肪细胞分化的相关标志 | 第21-22页 |
| ·前脂肪细胞分化的调控 | 第22-24页 |
| ·前脂肪细胞分化的诱导 | 第24页 |
| 3 实时荧光定量PCR的数据分析 | 第24-28页 |
| ·绝对定量 | 第25-26页 |
| ·相对定量 | 第26-28页 |
| ·标准曲线法的相对定量 | 第26-27页 |
| ·比较Ct法的相对定量 | 第27-28页 |
| 4 差异表达基因的筛选、分离与鉴定 | 第28-42页 |
| ·差异表达基因的筛选方法 | 第28-36页 |
| ·差别杂交 | 第28-29页 |
| ·扣除杂交 | 第29页 |
| ·mRNA差异显示PCR | 第29页 |
| ·代表性差异分析 | 第29-30页 |
| ·交互扣除RNA差别显示技术 | 第30-31页 |
| ·基因表达系列分析 | 第31页 |
| ·基因芯片 | 第31-32页 |
| ·抑制消减杂交 | 第32-36页 |
| ·基因功能分类的方法 | 第36-39页 |
| ·Gene Ontology(GO) | 第36-37页 |
| ·PANTHER | 第37-38页 |
| ·DAVID | 第38-39页 |
| ·电子克隆 | 第39-42页 |
| ·电子克隆的基本原理 | 第39页 |
| ·电子克隆的实施方案 | 第39-42页 |
| 5 本研究的目的意义 | 第42页 |
| 参考文献 | 第42-52页 |
| 第二章 猪前脂肪细胞系的建立及生长动力学研究 | 第52-59页 |
| 1 前言 | 第52页 |
| 2 材料与方法 | 第52-54页 |
| ·材料 | 第52-53页 |
| ·实验动物 | 第52页 |
| ·培养液及主要试剂的配制 | 第52-53页 |
| ·仪器设备 | 第53页 |
| ·方法 | 第53-54页 |
| ·猪前脂肪细胞的原代培养 | 第53页 |
| ·猪前脂肪细胞的传代 | 第53页 |
| ·细胞观察 | 第53-54页 |
| ·细胞冻存、复苏及冻存前和复苏后的存活率测定 | 第54页 |
| ·生长曲线的绘制 | 第54页 |
| ·染色体标本的制备 | 第54页 |
| 3 结果与分析 | 第54-56页 |
| ·原代培养猪前脂肪细胞的形态学观察 | 第54-55页 |
| ·猪前脂肪细胞的传代培养 | 第55页 |
| ·猪前脂肪细胞冻存前和复苏后存活率的测定 | 第55页 |
| ·猪前脂肪细胞的生长曲线 | 第55-56页 |
| ·核型分析 | 第56页 |
| 4 讨论 | 第56-57页 |
| ·关于猪前脂肪细胞的原代培养 | 第56-57页 |
| ·传代培养与胰酶消化 | 第57页 |
| ·猪前脂肪细胞的生长特性 | 第57页 |
| ·前脂肪细胞系的鉴定 | 第57页 |
| ·关于微生物污染检测 | 第57页 |
| 参考文献 | 第57-59页 |
| 第三章 猪前脂肪细胞的诱导分化和聚脂相关基因表达模式研究 | 第59-87页 |
| 1 前言 | 第59-60页 |
| 2 材料与方法 | 第60-66页 |
| ·材料 | 第60-61页 |
| ·试验细胞 | 第60页 |
| ·培养液及主要试剂的配制 | 第60-61页 |
| ·仪器设备 | 第61页 |
| ·试验方法 | 第61-66页 |
| ·猪前脂肪细胞的诱导分化及细胞形态观察 | 第61页 |
| ·油红O染色提取法测定细胞内脂肪含量 | 第61-62页 |
| ·聚脂相关基因的表达模式检测 | 第62-66页 |
| 3 结果与分析 | 第66-81页 |
| ·猪前脂肪细胞分化过程中的形态学观察 | 第66-67页 |
| ·前脂肪细胞分化过程中细胞内脂肪含量测定 | 第67页 |
| ·聚脂相关基因的表达模式 | 第67-81页 |
| ·Total RNA抽提结果 | 第67-68页 |
| ·各基因标准曲线绘制及融解曲线 | 第68页 |
| ·各基因QRT-PCR结果(针对11个诱导分化时间点) | 第68-75页 |
| ·各基因QRT-PCR结果(针对5个诱导分化时间点) | 第75-81页 |
| 4 讨论 | 第81-84页 |
| ·诱导分化后细胞的形态学观察比较 | 第81-82页 |
| ·细胞内脂肪含量测定 | 第82页 |
| ·基因表达检测(以11个时间点为基准进行讨论) | 第82-83页 |
| ·罗格列酮对相关基因表达的影响 | 第82页 |
| ·血清对相关基因表达的影响 | 第82-83页 |
| ·脂肪酸的生物合成和β氧化 | 第83页 |
| ·转录因子间的调控通路 | 第83页 |
| ·关于基因表达检测的时间点选择 | 第83-84页 |
| 5 小结 | 第84页 |
| 参考文献 | 第84-87页 |
| 第四章 猪前脂肪细胞诱导分化前后差异表达基因的筛选和鉴定 | 第87-152页 |
| 1 前言 | 第87页 |
| 2 材料与方法 | 第87-103页 |
| ·材料 | 第87-91页 |
| ·试验细胞 | 第87页 |
| ·培养液及主要试剂的配制 | 第87-90页 |
| ·仪器设备 | 第90-91页 |
| ·试验方法 | 第91-103页 |
| ·前脂肪细胞的培养和诱导分化 | 第91页 |
| ·诱导分化前后细胞总RNA的提取 | 第91页 |
| ·RNA质检、浓度测定和RNA pool构建 | 第91-92页 |
| ·mRNA的分离纯化 | 第92-93页 |
| ·抑制性消减杂交 | 第93-98页 |
| ·消减文库生成 | 第98-100页 |
| ·消减cDNA文库的斑点杂交筛选 | 第100-102页 |
| ·序列测定 | 第102页 |
| ·差异表达EST生物信息学分析 | 第102-103页 |
| 3 结果与分析 | 第103-148页 |
| ·诱导分化前后细胞总RNA的提取及检测 | 第103页 |
| ·mRNA的分离纯化 | 第103-104页 |
| ·抑制消减杂交 | 第104-107页 |
| ·双链cDNA(dscDNA)的合成与酶切 | 第104页 |
| ·接头连接效率检测 | 第104-105页 |
| ·消减产物第二次PCR扩增 | 第105页 |
| ·消减效率检测 | 第105-106页 |
| ·消减文库中插入片段的PCR鉴定 | 第106-107页 |
| ·斑点杂交 | 第107-108页 |
| ·差异表达克隆序列测定 | 第108页 |
| ·EST序列同源性比对及EST分类 | 第108-119页 |
| ·已知基因的功能分类 | 第119-144页 |
| ·基于Panther的基因功能分类 | 第119-139页 |
| ·基于DAVID的基因功能分类 | 第139-140页 |
| ·基于DAVID的功能相关基因的聚类 | 第140-144页 |
| ·相关基因的电子克隆 | 第144-148页 |
| 4 讨论 | 第148-150页 |
| ·关于mRNA的质和量 | 第148页 |
| ·关于RsaⅠ酶切消化 | 第148页 |
| ·关于接头的连接效率 | 第148-149页 |
| ·关于消减效率检测 | 第149页 |
| ·关于斑点杂交筛选阳性差异表达克隆 | 第149页 |
| ·关于EST序列的同源性比对 | 第149页 |
| ·关于基因功能分类 | 第149-150页 |
| ·关于电子克隆 | 第150页 |
| 参考文献 | 第150-152页 |
| 第五章 结论与展望 | 第152-156页 |
| 1 本文研究总结 | 第152-154页 |
| 2 下一步研究的方向和思路 | 第154-155页 |
| 参考文献 | 第155-156页 |
| 致谢 | 第156-157页 |
| 博士在读期间发表的论文(2004～2009) | 第157页 |
