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DR5在食管癌细胞失巢凋亡中的作用及机制

中文摘要第1-5页
Abstract第5-11页
1 引言第11-14页
2 材料、试剂与仪器第14-24页
   ·主要试剂及配制第14-22页
   ·主要仪器第22-24页
3 方法与步骤第24-44页
   ·细胞培养第24页
   ·制备DH5a 宿主菌感受态细胞第24-25页
   ·细菌的转化第25页
   ·质粒扩增和提取第25-26页
   ·pDR5-siRNA 质粒双酶切鉴定第26-27页
   ·食管癌细胞基因共转染及食管癌基因沉默稳定细胞系的建立第27-28页
   ·基因转染对细胞生长的影响第28页
   ·流式细胞术检测去粘附化对细胞成活的影响第28页
   ·失巢凋亡的形态学观察第28-29页
   ·失巢凋亡的亚二倍体分析第29页
   ·失巢凋亡的DNALadder 分析第29-30页
   ·流式细胞仪检测细胞凋亡第30-31页
   ·流式细胞术检测细胞表面DR5第31页
   ·免疫细胞化学法观察食管癌细胞DR5 表达分布第31-32页
   ·免疫荧光方法食管癌细胞DR5 表达分布第32页
   ·定量PCR 分析DR5 基因表达第32-33页
   ·RT-PCR第33-35页
   ·PCR 产物的定量分析第35页
   ·流式细胞仪检测细胞内ROS第35-36页
   ·流式细胞仪检测细胞内线粒体膜电位变化JC-1 方法第36-37页
   ·流式细胞仪检测细胞内Ca2+浓度变化第37页
   ·乙酰半胱氨酸对食管癌细胞ROS、DR5 表达、细胞凋亡及线粒体膜电位的影响第37-38页
   ·细胞总蛋白的提取第38页
   ·总蛋白定量(BCA 法)第38页
   ·蛋白质凝胶电泳第38-40页
   ·Western blotting 蛋白转印第40-42页
   ·免疫共沉淀法分析DISC 复合物的形成第42-43页
   ·数据处理及统计分析第43-44页
4 结果第44-66页
   ·DR5 基因沉默质粒的双酶切鉴定第44页
   ·DR5 基因沉默细胞株的建立及鉴定第44-46页
   ·去粘附化对细胞成活的影响第46-47页
   ·EC109 细胞失巢凋亡的形态学变化第47-48页
   ·食管癌细胞的亚二倍体分析第48-50页
   ·流式细胞术分析食管癌细胞的失巢凋亡第50-52页
   ·粘附化增强食管癌细胞对抗体mDRA-6 诱导凋亡的敏感性第52页
   ·酶免疫细胞化学法观察食管癌细胞DR5 的分布第52-53页
   ·免疫荧光法观察食管癌细胞DR5 的分布第53-54页
   ·流式细胞术定量分析细胞表面DR5 表达第54-56页
   ·去粘附对DR5 的基因表达的影响第56-57页
   ·失巢凋亡过程中食管癌细胞的线粒体膜电位变化第57-58页
   ·去粘附化状态下食管癌细胞内ROS 分析第58-59页
   ·失巢凋亡过程中食管癌细胞内Ca2+分析第59-61页
   ·乙酰半胱氨酸对食管癌细胞ROS、DR5 表达、细胞凋亡的影响第61页
   ·失巢凋亡过程中Caspase 的免疫印迹分析第61-63页
   ·细胞色素C 及Bid 的免疫印迹分析第63-64页
   ·免疫共沉淀法分析DISC 复合物的形成第64-66页
5 讨论第66-71页
参考文献第71-75页
结论第75-76页
文献综述第76-85页
附录第85-87页
在读期间发表及参与的学术论文与研究成果第87-88页
致谢第88页

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