中文摘要 | 第1-5页 |
Abstract | 第5-11页 |
1 引言 | 第11-14页 |
2 材料、试剂与仪器 | 第14-24页 |
·主要试剂及配制 | 第14-22页 |
·主要仪器 | 第22-24页 |
3 方法与步骤 | 第24-44页 |
·细胞培养 | 第24页 |
·制备DH5a 宿主菌感受态细胞 | 第24-25页 |
·细菌的转化 | 第25页 |
·质粒扩增和提取 | 第25-26页 |
·pDR5-siRNA 质粒双酶切鉴定 | 第26-27页 |
·食管癌细胞基因共转染及食管癌基因沉默稳定细胞系的建立 | 第27-28页 |
·基因转染对细胞生长的影响 | 第28页 |
·流式细胞术检测去粘附化对细胞成活的影响 | 第28页 |
·失巢凋亡的形态学观察 | 第28-29页 |
·失巢凋亡的亚二倍体分析 | 第29页 |
·失巢凋亡的DNALadder 分析 | 第29-30页 |
·流式细胞仪检测细胞凋亡 | 第30-31页 |
·流式细胞术检测细胞表面DR5 | 第31页 |
·免疫细胞化学法观察食管癌细胞DR5 表达分布 | 第31-32页 |
·免疫荧光方法食管癌细胞DR5 表达分布 | 第32页 |
·定量PCR 分析DR5 基因表达 | 第32-33页 |
·RT-PCR | 第33-35页 |
·PCR 产物的定量分析 | 第35页 |
·流式细胞仪检测细胞内ROS | 第35-36页 |
·流式细胞仪检测细胞内线粒体膜电位变化JC-1 方法 | 第36-37页 |
·流式细胞仪检测细胞内Ca2+浓度变化 | 第37页 |
·乙酰半胱氨酸对食管癌细胞ROS、DR5 表达、细胞凋亡及线粒体膜电位的影响 | 第37-38页 |
·细胞总蛋白的提取 | 第38页 |
·总蛋白定量(BCA 法) | 第38页 |
·蛋白质凝胶电泳 | 第38-40页 |
·Western blotting 蛋白转印 | 第40-42页 |
·免疫共沉淀法分析DISC 复合物的形成 | 第42-43页 |
·数据处理及统计分析 | 第43-44页 |
4 结果 | 第44-66页 |
·DR5 基因沉默质粒的双酶切鉴定 | 第44页 |
·DR5 基因沉默细胞株的建立及鉴定 | 第44-46页 |
·去粘附化对细胞成活的影响 | 第46-47页 |
·EC109 细胞失巢凋亡的形态学变化 | 第47-48页 |
·食管癌细胞的亚二倍体分析 | 第48-50页 |
·流式细胞术分析食管癌细胞的失巢凋亡 | 第50-52页 |
·粘附化增强食管癌细胞对抗体mDRA-6 诱导凋亡的敏感性 | 第52页 |
·酶免疫细胞化学法观察食管癌细胞DR5 的分布 | 第52-53页 |
·免疫荧光法观察食管癌细胞DR5 的分布 | 第53-54页 |
·流式细胞术定量分析细胞表面DR5 表达 | 第54-56页 |
·去粘附对DR5 的基因表达的影响 | 第56-57页 |
·失巢凋亡过程中食管癌细胞的线粒体膜电位变化 | 第57-58页 |
·去粘附化状态下食管癌细胞内ROS 分析 | 第58-59页 |
·失巢凋亡过程中食管癌细胞内Ca2+分析 | 第59-61页 |
·乙酰半胱氨酸对食管癌细胞ROS、DR5 表达、细胞凋亡的影响 | 第61页 |
·失巢凋亡过程中Caspase 的免疫印迹分析 | 第61-63页 |
·细胞色素C 及Bid 的免疫印迹分析 | 第63-64页 |
·免疫共沉淀法分析DISC 复合物的形成 | 第64-66页 |
5 讨论 | 第66-71页 |
参考文献 | 第71-75页 |
结论 | 第75-76页 |
文献综述 | 第76-85页 |
附录 | 第85-87页 |
在读期间发表及参与的学术论文与研究成果 | 第87-88页 |
致谢 | 第88页 |