| 摘要 | 第3-5页 |
| abstract | 第5-7页 |
| 前言 | 第11-23页 |
| 1.1 AREG基因和蛋白质结构 | 第11-12页 |
| 1.2 AREG蛋白的加工和分布 | 第12-13页 |
| 1.3 AREG蛋白的信号转导 | 第13-14页 |
| 1.4 调节AREG对于感染的抗性和耐受性 | 第14-15页 |
| 1.5 AREG统筹的组织修复和自身稳定 | 第15-17页 |
| 1.6 AREG促进纤维化 | 第17-18页 |
| 1.7 AREG和调节性T细胞能够抑制局部炎症 | 第18-19页 |
| 1.8 AREG促进肿瘤微环境中的免疫抑制 | 第19-21页 |
| 1.9 AREG在癌症中的作用 | 第21-23页 |
| 材料和方法 | 第23-47页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-27页 |
| 2.1.1 细胞系和主要特征 | 第23-24页 |
| 2.1.2 质粒 | 第24页 |
| 2.1.3 病毒载体 | 第24页 |
| 2.1.4 抗体 | 第24-25页 |
| 2.1.5 试剂盒 | 第25页 |
| 2.1.6 试剂 | 第25-27页 |
| 2.1.7 实验动物 | 第27页 |
| 2.2 主要仪器 | 第27-28页 |
| 2.3 实验方法 | 第28-47页 |
| 2.3.1 配置培养基和实验溶液 | 第28-29页 |
| 2.3.2 构建PLVX-IRES-AREG-Flag质粒 | 第29-34页 |
| 2.3.3 构建lentiCRISPRv2 AREG gRNA质粒 | 第34-36页 |
| 2.3.4 细胞培养 | 第36页 |
| 2.3.5 构建并筛选细胞系 | 第36-37页 |
| 2.3.6 提取总RNA(冰上操作) | 第37-38页 |
| 2.3.7 反转录 | 第38页 |
| 2.3.8 实时荧光定量PCR | 第38-39页 |
| 2.3.9 免疫沉淀(Western Blot) | 第39-41页 |
| 2.3.10 MTT检测细胞增殖 | 第41页 |
| 2.3.11 细胞克隆形成实验 | 第41页 |
| 2.3.12 细胞周期检测 | 第41页 |
| 2.3.13 辐照处理肿瘤细胞 | 第41-42页 |
| 2.3.14 化疗药物处理肿瘤细胞 | 第42页 |
| 2.3.15 细胞失巢凋亡检测 | 第42页 |
| 2.3.16 检测肿瘤中AREG蛋白表达 | 第42-43页 |
| 2.3.17 鉴定单克隆抗体特异性和交叉反应 | 第43页 |
| 2.3.18 纯化单克隆抗体 | 第43页 |
| 2.3.19 荷瘤实验 | 第43-44页 |
| 2.3.20 肿瘤组织中免疫细胞的FACS分析 | 第44-45页 |
| 2.3.21 数据分析 | 第45-47页 |
| 结果 | 第47-73页 |
| 3.1 AREG对肿瘤生存,增殖的影响 | 第47-56页 |
| 3.1.1 AREG过表达肿瘤细胞系的构建 | 第47-50页 |
| 3.1.2 AREG对肿瘤细胞体外生长的影响 | 第50-52页 |
| 3.1.3 AREG对肿瘤细胞体内生长的影响 | 第52-56页 |
| 3.2 辐照、化疗药物诱导肿瘤细胞AREG表达及其促肿瘤生长的效应 | 第56-68页 |
| 3.2.1 辐照、化疗药物诱导肿瘤细胞AREG表达情况 | 第56-58页 |
| 3.2.2 利用Crispr-Cas9 system构建AREG敲除鼠源肿瘤细胞系 | 第58-62页 |
| 3.2.3 辐照的AREG缺陷和表达的Hepa1-6 细胞通过旁分泌机制对肿瘤细胞体外生长的影响 | 第62-65页 |
| 3.2.4 辐照的AREG缺陷和表达的Hepa1-6 细胞通过旁分泌机制对肿瘤细胞体内生长的影响 | 第65-68页 |
| 3.3 鼠抗人AREG单克隆中和抗体的制备 | 第68-73页 |
| 3.3.1 筛选AREG单克隆抗体杂交瘤细胞 | 第68-69页 |
| 3.3.2 纯化和筛选AREG单克隆中和抗体 | 第69-73页 |
| 讨论 | 第73-79页 |
| 结论 | 第79-81页 |
| 参考文献 | 第81-89页 |
| 致谢 | 第89-91页 |
