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解纤维热酸菌L-阿拉伯糖异构酶的克隆表达、性质研究及分子改造

摘要第1-5页
Abstract第5-10页
第一章 绪论第10-27页
   ·概述---功能性甜味剂第10页
   ·稀有糖第10-13页
     ·稀有糖的定义第10页
     ·稀有糖的研究进展第10-13页
   ·D-塔格糖第13-17页
     ·D-塔格糖的结构和理化性质第13-14页
     ·D-塔格糖的代谢途径第14-15页
     ·D-塔格糖的生理功能第15-16页
     ·D-塔格糖的生物法制备第16-17页
   ·L-阿拉伯糖异构酶的研究进展第17-21页
     ·L-阿拉伯糖异构酶的微生物来源第17-18页
     ·L-阿拉伯糖异构酶的性质第18-20页
     ·L-阿拉伯糖异构酶的蛋白质基因工程第20-21页
     ·L-阿拉伯糖异构酶与D-塔格糖的生产第21页
   ·本课题的立题依据和意义第21-23页
   ·本课题研究思路与主要内容第23页
 参考文献第23-27页
第二章 A. cellulolytics L-阿拉伯糖异构酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达第27-50页
   ·前言第27-28页
   ·材料与方法第28-36页
     ·菌种与质粒第28页
     ·培养基第28页
     ·主要试剂第28-29页
     ·主要仪器第29页
     ·L-阿拉伯糖异构酶基因的克隆第29-32页
     ·L-阿拉伯糖异构酶基因在大肠杆菌中的表达第32-36页
   ·结果与讨论第36-47页
     ·L-阿拉伯糖异构酶基因的扩增第36-37页
     ·PCR 产物的克隆第37-39页
     ·L-阿拉伯糖异构酶基因的测序及序列分析第39-42页
     ·L-阿拉伯糖异构酶表达质粒的构建第42-43页
     ·表达产物的SDS-PAGE 分析第43-44页
     ·诱导表达条件的优化第44-46页
     ·重组细胞催化D-半乳糖异构化反应第46-47页
   ·本章小结第47页
 参考文献第47-50页
第三章 重组L-阿拉伯糖异构酶的分离、纯化及活性研究第50-59页
   ·前言第50-51页
   ·材料与方法第51-53页
     ·菌种及保藏方法第51页
     ·主要实验材料第51页
     ·主要实验仪器第51页
     ·主要实验方法第51-53页
   ·结果与讨论第53-57页
     ·Q-Sepharose Fast Folw 离子交换层析第53页
     ·Superdex 200 (10/300 GL) 凝胶过滤层析第53-54页
     ·Superdex 200 凝胶色谱确定L-阿拉伯糖异构酶分子量第54-55页
     ·纯化结果及SDS-PAGE 电泳鉴定第55-57页
   ·本章小结第57-58页
 参考文献第58-59页
第四章 L-阿拉伯糖异构酶的酶学性质研究第59-70页
   ·前言第59页
   ·材料与方法第59-61页
     ·实验材料第59页
     ·主要实验仪器第59页
     ·主要实验方法第59-61页
   ·结果与讨论第61-67页
     ·最适温度及最适pH第61-62页
     ·金属离子对酶活的影响第62-64页
     ·热稳定性及pH 稳定性第64-65页
     ·L-阿拉伯糖异构酶的底物特异性研究第65页
     ·L-阿拉伯糖异构酶的反应动力学常数第65-67页
   ·本章小结第67-68页
 参考文献第68-70页
第五章 A. cellulolytics L-阿拉伯糖异构酶的催化机理初探及分子改造第70-85页
   ·前言第70页
   ·材料与方法第70-75页
     ·菌种与质粒第70-71页
     ·主要试剂第71页
     ·主要仪器第71页
     ·主要实验方法第71-75页
   ·结果与讨论第75-83页
     ·L-阿拉伯糖异构酶的结构分析及活性位点预测第75-77页
     ·改造位点的确定第77-78页
     ·L-阿拉伯糖异构酶基因定点突变PCR 扩增第78-79页
     ·L-阿拉伯糖异构酶突变体基因的测序及序列分析第79页
     ·L-阿拉伯糖异构酶突变体表达质粒的构建第79-80页
     ·表达产物的SDS-PAGE 分析第80-81页
     ·突变体酶纯化结果SDS-PAGE 电泳鉴定第81页
     ·突变体酶催化性质研究第81-83页
   ·本章小结第83页
 参考文献第83-85页
论文主要结论第85-87页
论文创新点第87-88页
致谢第88-89页
附录:作者在攻读博士学位期间发表的论文第89页

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