| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4-5页 |
| 主要英文缩略词对照表 | 第9-10页 |
| 第1章 引言 | 第10-37页 |
| 1.1 细胞自噬简介 | 第10-13页 |
| 1.1.1 细胞自噬定义及其研究历史概述 | 第10页 |
| 1.1.2 细胞自噬分类 | 第10-11页 |
| 1.1.3 细胞自噬的过程 | 第11-13页 |
| 1.2 细胞自噬的核心蛋白机器 | 第13-19页 |
| 1.2.1 ATG1/ULK1复合物 | 第13-14页 |
| 1.2.2 PI3KC3复合物 | 第14-16页 |
| 1.2.3 PI3P效应蛋白：ATG2-ATG18/WIPI复合物 | 第16-17页 |
| 1.2.4 ATG9膜蛋白 | 第17-18页 |
| 1.2.5 两个类泛素化系统 | 第18-19页 |
| 1.3 磷酸肌醇在细胞自噬中的作用 | 第19-22页 |
| 1.3.1 PI3P | 第19-20页 |
| 1.3.2 PI5P和PI(3,5)P2 | 第20-21页 |
| 1.3.3 PI4P和PI(4,5)P2 | 第21页 |
| 1.3.4 PI(3,4)P2和PI(3,4,5)P3 | 第21-22页 |
| 1.4 PI3K复合物的结构研究概述 | 第22-31页 |
| 1.4.1 酵母PI3K复合物的结构研究现状 | 第22-26页 |
| 1.4.2 哺乳动物PI3KC3复合物的结构研究现状 | 第26-31页 |
| 1.5 冷冻电镜重构单颗粒技术的原理和流程 | 第31-36页 |
| 1.5.1 电子显微镜简介 | 第31-33页 |
| 1.5.2 电镜单颗粒重构技术的原理 | 第33-34页 |
| 1.5.3 限制冷冻电镜单颗粒技术分辨率的因素 | 第34页 |
| 1.5.4 冷冻电镜单颗粒技术的基本流程 | 第34-36页 |
| 1.6 本研究目的和意义 | 第36-37页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第37-67页 |
| 2.1 实验材料 | 第37-52页 |
| 2.1.1 载体 | 第37-38页 |
| 2.1.2 引物 | 第38-41页 |
| 2.1.3 菌株和细胞 | 第41-42页 |
| 2.1.4 试剂和抗体 | 第42-43页 |
| 2.1.5 自备培养基和缓冲液的配制 | 第43-49页 |
| 2.1.6 仪器与耗材 | 第49-52页 |
| 2.2 实验方法 | 第52-67页 |
| 2.2.1 载体构建 | 第52-60页 |
| 2.2.2 蛋白表达纯化 | 第60-62页 |
| 2.2.3 PI3K激酶活性实验 | 第62-63页 |
| 2.2.4 脂质体漂浮实验 | 第63-64页 |
| 2.2.5 蛋白免疫印迹 | 第64-65页 |
| 2.2.6 内质网提取 | 第65页 |
| 2.2.7 内质网与蛋白结合实验 | 第65页 |
| 2.2.8 电镜相关实验 | 第65-67页 |
| 第3章 人源PI3KC3复合物的表达纯化分析 | 第67-76页 |
| 3.1 引言 | 第67页 |
| 3.2 实验结果 | 第67-75页 |
| 3.2.1 大肠杆菌等表达系统中无法得到完整的人源PI3KC3复合物 | 第67-68页 |
| 3.2.2 HEK293细胞中纯化得到性质较好且完整的人源PI3KC3复合物 | 第68-74页 |
| 3.2.3 从HEK293细胞提纯的人源PI3KC3复合物具有酶活性 | 第74-75页 |
| 3.2.4 人源PI3KC3复合物有多个未报道的磷酸化修饰位点,功能未知 | 第75页 |
| 3.3 本章小结 | 第75-76页 |
| 第4章 人源PI3KC3-C1和C2复合物的冷冻电镜结构 | 第76-87页 |
| 4.1 引言 | 第76页 |
| 4.2 结果 | 第76-86页 |
| 4.2.1 人源PI3KC3-C1和C2复合物的负染电镜分析 | 第76-81页 |
| 4.2.2 人源PI3KC3-C1和C2复合物的冷冻电镜三维重构 | 第81-84页 |
| 4.2.3 人源PI3KC3-C1和C2复合物原子模型的建立 | 第84-85页 |
| 4.2.5 人源PI3KC3-C1和C2复合物结构的比较 | 第85-86页 |
| 4.3 本章小结 | 第86-87页 |
| 第5章 人源PI3KC3-C1复合物在膜上呈“站立”构象 | 第87-95页 |
| 5.1 引言 | 第87页 |
| 5.2 实验结果 | 第87-94页 |
| 5.2.1 人源PI3KC3-C1复合物能够结合PI3P和PI | 第87-89页 |
| 5.2.2 ATG14LC末端的BATs结构域决定人源PI3KC3-C1的膜结合活性 | 第89-91页 |
| 5.2.3 VPS34CTD决定人源PI3KC3-C1复合物在膜上采取“站立”的构象 | 第91-94页 |
| 5.3 本章小结 | 第94-95页 |
| 第6章 人源PI3KC3-C1和C2复合物具有不同的膜结合活性 | 第95-100页 |
| 6.1 引言 | 第95页 |
| 6.2 实验结果 | 第95-99页 |
| 6.2.1 人源PI3KC3-C1比C2复合物具有更强的PI3P结合能力 | 第95-96页 |
| 6.2.2 人源PI3KC3-C1比C2复合物具有更强的PI结合能力 | 第96-98页 |
| 6.2.3 人源PI3KC3-C1比C2复合物具有更强的内质网结合能力 | 第98-99页 |
| 6.3 本章小结 | 第99-100页 |
| 第7章 人源PI3KC3-C1体外形成cluster | 第100-111页 |
| 7.1 引言 | 第100页 |
| 7.2 实验结果 | 第100-110页 |
| 7.2.1 人源PI3KC3-C1复合物与磷脂作用形成无规则cluster | 第100-105页 |
| 7.2.2 人源PI3KC3-C1复合物cluster的形成依赖于VPS34的激酶活性 | 第105-108页 |
| 7.2.3 人源PI3KC3-C1复合物cluster的形成依赖于其膜结合活性 | 第108-110页 |
| 7.3 本章小结 | 第110-111页 |
| 第8章 讨论与展望 | 第111-116页 |
| 8.1 本文总结 | 第111-112页 |
| 8.2 讨论与展望 | 第112-116页 |
| 8.2.1 人源PI3KC3蛋白复合物的表达纯化和结构解析 | 第112-114页 |
| 8.2.2 人源PI3KC3-C1和C2复合物结构的比较 | 第114页 |
| 8.2.3 人源PI3KC3-C1和C2复合物在膜上的取向 | 第114-115页 |
| 8.2.4 人源PI3KC3-C1复合物与膜成分形成的cluster与欧米茄体关系 | 第115-116页 |
| 参考文献 | 第116-128页 |
| 致谢 | 第128-131页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第131页 |
