| 摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13-15页 |
| 1 前言 | 第16-35页 |
| 1.1 乳腺的组织发育与泌乳 | 第16-17页 |
| 1.2 乳的生化组成 | 第17-18页 |
| 1.2.1 乳中的蛋白质和乳糖 | 第17页 |
| 1.2.2 乳脂 | 第17-18页 |
| 1.2.3 乳中的其它成分 | 第18页 |
| 1.3 乳成分的合成 | 第18-20页 |
| 1.3.1 乳蛋白和乳糖的合成 | 第18-19页 |
| 1.3.2 乳脂的合成 | 第19-20页 |
| 1.4 乳合成相关基因及信号转导通路 | 第20-25页 |
| 1.4.1 mTOR信号通路 | 第20-22页 |
| 1.4.2 SREBP信号通路 | 第22-23页 |
| 1.4.3 PI3K-AKT信号通路 | 第23-24页 |
| 1.4.4 乳脂肪合成信号通路研究进展 | 第24-25页 |
| 1.5 营养素和激素对泌乳的调节作用 | 第25-27页 |
| 1.5.1 营养素对泌乳的调节作用 | 第25-26页 |
| 1.5.2 激素对泌乳的调节作用 | 第26页 |
| 1.5.3 脂肪酸在泌乳中的作用 | 第26-27页 |
| 1.6 FABP5基因的功能研究 | 第27-33页 |
| 1.6.1 FABP家族的功能 | 第27-28页 |
| 1.6.2 FABP基因功能的研究进展 | 第28-29页 |
| 1.6.3 FABP5的结构与功能 | 第29页 |
| 1.6.4 FABP5基因功能的研究进展 | 第29-31页 |
| 1.6.5 SREBP基因功能的研究进展 | 第31-32页 |
| 1.6.6 PPAR基因功能的研究进展 | 第32-33页 |
| 1.7 实验目的与意义 | 第33-35页 |
| 2 材料与方法 | 第35-57页 |
| 2.1 实验材料 | 第35-38页 |
| 2.1.1 主要实验试剂 | 第35-36页 |
| 2.1.2 主要实验仪器 | 第36页 |
| 2.1.3 实验动物与细胞 | 第36-37页 |
| 2.1.4 实验所用试剂配制方法 | 第37-38页 |
| 2.2 奶牛乳腺上皮细胞的原代培养、纯化与鉴定 | 第38-42页 |
| 2.2.1 奶牛乳腺上皮细胞的原代培养与纯化 | 第38-40页 |
| 2.2.2 奶牛乳腺上皮细胞的鉴定 | 第40-42页 |
| 2.3 FABP5在奶牛乳腺组织和细胞中的表达与定位 | 第42-44页 |
| 2.3.1 FABP5在不同泌乳时期的表达 | 第42-43页 |
| 2.3.2 FABP5在不同泌乳时期的定位 | 第43页 |
| 2.3.3 细胞免疫荧光方法鉴定FABP5在奶牛乳腺上皮细胞中的定位 | 第43页 |
| 2.3.4 分离细胞核蛋白与细胞浆蛋白后WB鉴定FABP5的定位 | 第43-44页 |
| 2.4 检测蛋氨酸、雌激素对BMECs乳脂肪合成的影响 | 第44-46页 |
| 2.4.1 WB检测添加蛋氨酸、雌激素对乳脂合成相关基因表达的影响 | 第44-45页 |
| 2.4.2 添加蛋氨酸、雌激素后免疫荧光检测FABP5的表达变化 | 第45页 |
| 2.4.3 添加蛋氨酸、雌激素对奶牛乳腺上皮细胞甘油三酯分泌的影响 | 第45页 |
| 2.4.4 添加蛋氨酸、雌激素对奶牛乳腺上皮细胞脂滴分泌的影响 | 第45-46页 |
| 2.5 FABP5基因过表达对奶牛乳腺上皮细胞乳脂合成的影响 | 第46-51页 |
| 2.5.1 FABP5基因过表达载体的构建 | 第46-49页 |
| 2.5.2 FABP5基因过表达载体的转染 | 第49页 |
| 2.5.3 qRT-PCR检测FABP5基因过表达后乳合成相关基因mRNA水平 | 第49-51页 |
| 2.5.4 WB检测过表达FABP5基因后乳脂肪合成相关蛋白的表达 | 第51页 |
| 2.5.5 过表达FABP5基因对BMECs乳脂分泌的影响 | 第51页 |
| 2.6 FABP5基因抑制对奶牛乳腺上皮细胞乳脂肪合成的影响 | 第51-53页 |
| 2.6.1 FABP5最佳干扰片段及其最佳干扰时间的筛选 | 第51-52页 |
| 2.6.2 FABP5干扰片段的转染 | 第52-53页 |
| 2.6.3 qRT-PCR检测FABP5基因抑制乳脂肪合成相关基因mRNA表达变化 | 第53页 |
| 2.6.4 WB检测FABP5基因抑制对乳合成相关基因蛋白表达的影响 | 第53页 |
| 2.6.5 FABP5基因抑制对BMECs乳脂分泌的影响 | 第53页 |
| 2.7 FABP5介导蛋氨酸、雌激素信号调节乳脂肪合成的作用研究 | 第53-54页 |
| 2.7.1 添加蛋氨酸、雌激素同时干扰FABP5乳腺上皮细胞乳脂分泌的影响 | 第53-54页 |
| 2.7.2 添加蛋氨酸、雌激素同时干扰FABP5对相关基因mRNA表达的影响 | 第54页 |
| 2.7.3 WB检测添加蛋氨酸、雌激素同时干扰FABP5后乳脂合成相关基因的表达变化 | 第54页 |
| 2.7.4 同时添加蛋氨酸或雌激素和PI3K抑制剂后对FABP5蛋白表达的影响 | 第54页 |
| 2.8 FABP5介导氨基酸和激素信号调节SREBP-1c的机理研究 | 第54-56页 |
| 2.8.1 WB检测过表达和抑制FABP5后AKT、mTOR和NFκB1的表达 | 第54-55页 |
| 2.8.2 WB检测同时添加蛋氨酸或雌激素和脂肪酸后对FABP5蛋白表达的影响 | 第55页 |
| 2.8.3 WB检测过表达FABP5同时添加脂肪酸后对FABP5的表达的影响 | 第55页 |
| 2.8.4 WB检测过表达FABP5脂肪酸结合位点突变体后SREBP-1c的表达变化 | 第55-56页 |
| 2.9 数据分析 | 第56-57页 |
| 3 结果与分析 | 第57-80页 |
| 3.1 奶牛乳腺上皮细胞的原代培养、纯化与鉴定 | 第57-59页 |
| 3.2 FABP5在不同泌乳时期的奶牛乳腺组织及细胞中表达与定位 | 第59-62页 |
| 3.2.1 WB检测FABP5在不同泌乳时期奶牛乳腺组织中的表达变化 | 第59-60页 |
| 3.2.2 免疫荧光检测FABP5在不同泌乳时期奶牛乳腺组织中的定位 | 第60页 |
| 3.2.3 免疫荧光检测奶牛乳腺上皮细胞FABP5的定位 | 第60-61页 |
| 3.2.4 WB检测奶牛乳腺上皮细胞FABP5的定位 | 第61-62页 |
| 3.3 添加蛋氨酸、雌激素后FABP5的表达与定位 | 第62-64页 |
| 3.3.1 添加蛋氨酸、雌激素后对奶牛乳腺上皮细胞乳脂肪合成的影响 | 第62-63页 |
| 3.3.2 添加蛋氨酸、雌激素后FABP5的表达与定位 | 第63-64页 |
| 3.4 过表达FABP5基因对奶牛乳腺上皮细胞乳脂肪合成的影响 | 第64-68页 |
| 3.4.1 FABP5基因过表达载体的构建 | 第64-65页 |
| 3.4.2 FABP5基因过表达载体的转染 | 第65-66页 |
| 3.4.3 过表达FABP5基因对奶牛乳腺上皮细胞乳脂肪合成的影响 | 第66-68页 |
| 3.5 抑制FABP5基因对奶牛乳腺上皮细胞乳脂肪合成的影响 | 第68-72页 |
| 3.5.1 筛选FABP5最佳干扰片段与时间 | 第68-69页 |
| 3.5.2 FABP5干扰片段的转染效果 | 第69-70页 |
| 3.5.3 抑制FABP5基因对奶牛乳腺上皮细胞乳脂肪合成的影响 | 第70-72页 |
| 3.6 FABP5介导蛋氨酸、雌激素刺激诱导SREBP-1c基因表达的检测 | 第72-75页 |
| 3.6.1 蛋氨酸、雌激素处理同时抑制FABP5后对TG分泌的影响 | 第72-73页 |
| 3.6.2 蛋氨酸、雌激素处理同时抑制FABP5对相关基因mRNA的影响 | 第73-74页 |
| 3.6.3 蛋氨酸、雌激素处理同时抑制FABP5后对相关基因蛋白水平的影响 | 第74页 |
| 3.6.4 蛋氨酸、雌激素处理同时抑制PI3K信号通路后FABP5的表达变化 | 第74-75页 |
| 3.7 FABP5调节SREBP-1c基因表达变化的机理研究 | 第75-80页 |
| 3.7.1 FABP5对AKT,mTOR和NFκB1表达和活化的影响分析 | 第75-76页 |
| 3.7.2 蛋氨酸、雌激素依赖脂肪酸调节SREBP-1c的作用分析 | 第76-77页 |
| 3.7.3 FABP5对依赖脂肪酸调节SREBP-1c的作用分析 | 第77-78页 |
| 3.7.4 FABP5依赖其脂肪酸结合功能调节SREBP-1c的作用分析 | 第78-80页 |
| 4 讨论 | 第80-85页 |
| 4.1 FABP5的表达与定位 | 第80-81页 |
| 4.1.1 FABP5在不同泌乳时期的表达与定位 | 第80页 |
| 4.1.2 添加蛋氨酸、雌激素后FABP5的表达与定位 | 第80-81页 |
| 4.2 FABP5通过影响SREBP-1c的表达调节乳脂合成 | 第81-82页 |
| 4.3 蛋氨酸、雌激素通过PI3K信号通路上调SREBP-1c的表达 | 第82页 |
| 4.4 FABP5影响SREBP-1c表达依赖脂肪酸 | 第82-83页 |
| 4.5 总结 | 第83-85页 |
| 5 结论 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-99页 |
| 附录 | 第99-100页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第100页 |
