缩略词表 | 第5-8页 |
摘要 | 第8-11页 |
ABSTRACT | 第11-13页 |
第一章 研究背景综述 | 第14-65页 |
一、沙门氏菌 | 第15-28页 |
1. 沙门氏菌简介 | 第15页 |
2. 沙门氏菌感染 | 第15-17页 |
3. 沙门氏菌的感染机制——Ⅲ型分泌系统(T3SS) | 第17-23页 |
4. 沙门氏菌与外界交流的重要工具——外膜囊泡(OMVs) | 第23-28页 |
二、一氧化氮(NO)与免疫反应 | 第28-35页 |
1. 概述 | 第28-29页 |
2. NO的产生——一氧化氮合成酶(NOS) | 第29-32页 |
3. NO在免疫反应中的作用 | 第32-34页 |
3.1. NO与微生物感染 | 第32-34页 |
3.2. NO在其他免疫反应中的作用 | 第34页 |
4. 总结 | 第34-35页 |
三、微小核糖核酸(MICRORNA) | 第35-49页 |
1. microRNA简介 | 第35页 |
2. microRNA的生物合成 | 第35-40页 |
2.1. 动物miRNA合成的经典通路 | 第35-37页 |
2.2. 动物miRNA合成的非经典通路 | 第37-40页 |
2.3. 植物miRNA的合成 | 第40页 |
3. microRNA的作用机制 | 第40-42页 |
3.1. miRNA介导的mRNA特异性切割 | 第40-41页 |
3.2. miRNA介导的转录后调控 | 第41-42页 |
4. 分泌microRNA | 第42-46页 |
4.1. 分泌miRNA的发现 | 第42-43页 |
4.2. 分泌miRNA的包装与分泌机制 | 第43-44页 |
4.3. 分泌miRNA被受体细胞摄取及其参与调控机体的生理病理过程 | 第44-46页 |
5. microRNA的跨界调控作用 | 第46-49页 |
参考文献 | 第49-65页 |
第二章 实验部分 | 第65-133页 |
一、引言 | 第66-67页 |
二、实验材料与方法 | 第67-92页 |
1. 实验材料 | 第67-70页 |
1.1. 菌株、细胞系及模式动物 | 第67-68页 |
1.2. 主要试剂(表2.2.1) | 第68-70页 |
1.3. 主要仪器设备(表2.2.2) | 第70页 |
2. 实验方法 | 第70-92页 |
2.1. 细胞培养 | 第70-71页 |
2.2. 沙门氏菌侵染细胞实验 | 第71-72页 |
2.3. 沙门氏菌侵染能力的测定 | 第72页 |
2.4. RNA提取及qRT-PCR定量检测 | 第72-74页 |
2.5. Solexa测序 | 第74-76页 |
2.6. 转染细胞用除内毒素质粒的提取 | 第76-77页 |
2.7. 细胞转染 | 第77-78页 |
2.8. 免疫沉淀(IP)反应 | 第78-79页 |
2.9. 沙门氏菌来源的RNA分子Pri-Sal-1全长cDNA的获得及体外转录 | 第79-80页 |
2.10. Northern Blot | 第80-82页 |
2.11. 沙门氏菌OMV的提取 | 第82-83页 |
2.12. Dot Blot | 第83-84页 |
2.13. 生物信息学预测Sal-1的靶基因以及荧光素酶检测实验 | 第84-86页 |
2.14. Western Blot | 第86-88页 |
2.15. 沙门氏菌突变株SE2472△Sal-1(1,2,5,7)的构建 | 第88-89页 |
2.16. 组织免疫荧光实验 | 第89-90页 |
2.17. 体内实验 | 第90-92页 |
2.18. 数据的处理与统计分析 | 第92页 |
三、实验结果 | 第92-122页 |
1. 经沙门氏菌感染的哺乳动物细胞中可发现沙门氏菌来源的小分子RNA | 第92-95页 |
2. Sal-1的细胞内成熟需要细胞内Argonaute 2(Ago 2)蛋白的参与 | 第95-105页 |
3. 沙门氏菌将Sal-1包裹在OMV中送入宿主细胞 | 第105-107页 |
4. Sal-1能促进沙门氏菌在细胞内的生存率 | 第107-108页 |
5. Sal-1靶向宿主细胞内的诱导型一氧化氮合成酶(iNOS) | 第108-116页 |
6. Sal-1通过抑制结肠上皮细胞中iNOS的表达促进沙门氏菌感染小鼠的过程 | 第116-122页 |
四、结论 | 第122页 |
五、讨论 | 第122-130页 |
参考文献 | 第130-133页 |
攻读博士学位期间发表论文 | 第133-134页 |
致谢 | 第134-136页 |