| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 前言 | 第12-20页 |
| 1.1 环脂肽抗生素的简介 | 第12-14页 |
| 1.1.1 耐药菌的逐步出现,使研发新一代的抗菌药物变得迫切 | 第12-13页 |
| 1.1.2 环脂肽类抗生素的特征 | 第13-14页 |
| 1.2 荧光假单胞菌产生的环脂肽是有潜力的抗生素药物 | 第14-17页 |
| 1.2.1 荧光假单胞菌的特征及其研究现状 | 第14-15页 |
| 1.2.2 荧光假单胞菌所产的环脂肽抗生素的特征 | 第15-16页 |
| 1.2.3 荧光假单胞菌合成环脂肽的机理 | 第16-17页 |
| 1.3 有关研究方法的进展 | 第17-18页 |
| 1.3.1 筛选环脂肽方法的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.3.2 研究分子生态多样性的方法 | 第18页 |
| 1.4 本文研究的目的 | 第18-20页 |
| 第2章 产表面活性剂的荧光假单胞菌的筛选 | 第20-28页 |
| 2.1 引言 | 第20-21页 |
| 2.2 实验材料和实验仪器 | 第21-22页 |
| 2.2.1 根际土壤样品的采集与初步处理 | 第21页 |
| 2.2.2 实验所需培养基 | 第21页 |
| 2.2.3 实验所需试剂 | 第21页 |
| 2.2.4 实验所需仪器 | 第21-22页 |
| 2.3 实验方法 | 第22-24页 |
| 2.3.1 稀释涂布平板法分离土样中的细菌 | 第22页 |
| 2.3.2 荧光假单胞菌的筛选 | 第22-23页 |
| 2.3.3 产表面活性剂的荧光假单胞菌的筛选 | 第23页 |
| 2.3.4 在表面张力仪上测定表面张力 | 第23-24页 |
| 2.4 实验结果与分析 | 第24-26页 |
| 2.4.1 荧光假单胞菌的筛选 | 第24页 |
| 2.4.2 产表面活性剂的荧光假单胞菌的筛选结果 | 第24-25页 |
| 2.4.3 表面张力仪所测定的表面张力的结果 | 第25-26页 |
| 2.5 小结与讨论 | 第26-28页 |
| 第3章 产环脂肽荧光假单胞菌的筛选及菌种资源库的建立 | 第28-38页 |
| 3.1 引言 | 第28页 |
| 3.2 实验材料和实验器 | 第28-30页 |
| 3.2.1 实验所用菌种 | 第28页 |
| 3.2.2 本实验所用的载体、受体菌株 | 第28页 |
| 3.2.3 实验所用试剂 | 第28-29页 |
| 3.2.4 PCR扩增所用引物 | 第29-30页 |
| 3.2.5 实验所需仪器 | 第30页 |
| 3.3 实验方法 | 第30-34页 |
| 3.3.1 活化实验菌种 | 第30页 |
| 3.3.2 提取实验菌株的基因组 | 第30-31页 |
| 3.3.3 PCR扩增和PCR产物的胶回收 | 第31-33页 |
| 3.3.4 目的片段的连接 | 第33页 |
| 3.3.5 目的片段的转化与测序 | 第33-34页 |
| 3.3.6 携带有环脂肽NRPS基因的荧光假单胞菌菌种资源库的建立 | 第34页 |
| 3.4 实验结果与分析 | 第34-36页 |
| 3.4.1 菌种基因组的提取结果 | 第34页 |
| 3.4.2 PCR扩增结果 | 第34-35页 |
| 3.4.3 目的片段连接转化结果 | 第35页 |
| 3.4.4 测序结果 | 第35-36页 |
| 3.5 小结与讨论 | 第36-38页 |
| 第4章 携带环脂肽基因的荧光假单胞菌菌种多态性分析 | 第38-50页 |
| 4.1 引言 | 第38页 |
| 4.2 实验材料和实验仪器 | 第38-42页 |
| 4.2.1 实验所需菌种 | 第38页 |
| 4.2.2 DGGE电泳及染色所需试剂 | 第38-39页 |
| 4.2.3 实验所需的其它试剂 | 第39-40页 |
| 4.2.4 实验所需引物 | 第40页 |
| 4.2.5 实验所需仪器 | 第40-42页 |
| 4.3 实验方法 | 第42-44页 |
| 4.3.1 实验所需菌种的活化 | 第42页 |
| 4.3.2 实验菌株基因组的提取 | 第42页 |
| 4.3.3 目的菌株16S rDNA片段的PCR扩增 | 第42-43页 |
| 4.3.4 目的菌株16S rDNAV3区的PCR扩增与片段的纯化 | 第43页 |
| 4.3.5 DGGE电泳分析 | 第43-44页 |
| 4.4 实验结果与分析 | 第44-48页 |
| 4.4.1 目的菌株16S rDNA片段的PCR扩增 | 第44-45页 |
| 4.4.2 目的菌株16S rDNAV3区的PCR扩增 | 第45页 |
| 4.4.3 DGGE电泳结果 | 第45-48页 |
| 4.5 小结和讨论 | 第48-50页 |
| 第5章 环脂肽NRPS基因的SSCP分析 | 第50-66页 |
| 5.1 引言 | 第50页 |
| 5.2 实验材料和实验仪器 | 第50-53页 |
| 5.2.1 实验所需菌种 | 第50页 |
| 5.2.2 SSCP及染色所需试剂 | 第50-51页 |
| 5.2.3 实验所需的其它试剂 | 第51-52页 |
| 5.2.4 实验所需引物 | 第52页 |
| 5.2.5 实验所需仪器 | 第52-53页 |
| 5.3 实验方法 | 第53-56页 |
| 5.3.1 菌种活化 | 第53页 |
| 5.3.2 提取基因组 | 第53页 |
| 5.3.3 PCR扩增C1区与Te区 | 第53页 |
| 5.3.4 PCR扩增C1区与Te区的内巢片段 | 第53-55页 |
| 5.3.5 SSCP电泳中Marker的制备 | 第55页 |
| 5.3.6 单链构象多态性分析(SSCP) | 第55-56页 |
| 5.4 结果与分析 | 第56-64页 |
| 5.4.1 菌种基因组的提取结果 | 第56页 |
| 5.4.2 C1区,Te区内巢片段的PCR扩增结果 | 第56-57页 |
| 5.4.3 C1区,Te区SSCP电泳结果 | 第57-64页 |
| 5.5 小结和讨论 | 第64-66页 |
| 第6章 环脂肽NRPS基因Te区的酶切多态性分析 | 第66-76页 |
| 6.1 引言 | 第66页 |
| 6.2 实验材料和实验器 | 第66-68页 |
| 6.2.1 实验所用菌株 | 第66页 |
| 6.2.2 实验所用试剂 | 第66-67页 |
| 6.2.3 PCR扩增所用引物 | 第67页 |
| 6.2.4 酶切分型所用的限制性内切酶 | 第67页 |
| 6.2.5 实验所用仪器 | 第67-68页 |
| 6.3 实验方法 | 第68-69页 |
| 6.3.1 菌种活化 | 第68页 |
| 6.3.2 提取基因组 | 第68页 |
| 6.3.3 PCR扩增与其扩增产物的纯化 | 第68页 |
| 6.3.4 环脂肽基因的酶切分型 | 第68-69页 |
| 6.4 结果与分析 | 第69-74页 |
| 6.4.1 菌种基因组的提取结果 | 第69页 |
| 6.4.2 Te区的PCR扩增结果 | 第69-70页 |
| 6.4.3 酶切分型结果 | 第70-74页 |
| 6.5 小结和讨论 | 第74-76页 |
| 第7章 结论和展望 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
