| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 英文缩略语 | 第10-14页 |
| 第一部分：PAK1小分子抑制剂的筛选及活性验证 | 第14-27页 |
| 1 前言 | 第14-16页 |
| 2 材料和方法 | 第16-20页 |
| 2.1 主要试剂和仪器 | 第16-18页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第16-17页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第17-18页 |
| 2.2 实验方法 | 第18-20页 |
| 2.2.1 药物配制 | 第18页 |
| 2.2.2 脂质体转染法转染 | 第18页 |
| 2.2.3 免疫共沉淀 | 第18页 |
| 2.2.4 Kinase-Glo~?Luminescent Kinase Assay | 第18-19页 |
| 2.2.5 提取蛋白 | 第19页 |
| 2.2.6 WesternBlot | 第19页 |
| 2.2.7 激酶实验分析检测药物对激酶活性的影响 | 第19-20页 |
| 3 结果 | 第20-25页 |
| 3.1 体外Kinase Glo激酶发光法筛选出PAK1小分子抑制剂 | 第20-22页 |
| 3.2 体外激酶实验检测AK963/40708899对PAK1及Ⅱ类PAK家族成员PAK4和PAK6激酶活性的影响 | 第22-23页 |
| 3.3 小分子化合物AK963/40708899可以在细胞内抑制PAK1的激酶活性 | 第23-24页 |
| 3.4 理化性质比较分析结果显示化合物AK963/40708899具有更高的成药性,适合作为先导化合物进行进一步结构修饰和药物研发 | 第24-25页 |
| 4 讨论 | 第25-26页 |
| 5 结论 | 第26-27页 |
| 第二部分：小分子化合物AK963抑制人胃癌细胞增殖迁移及机制研究 | 第27-51页 |
| 1 前言 | 第27-29页 |
| 2 材料和方法 | 第29-34页 |
| 2.1 主要试剂和仪器 | 第29-31页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第29-30页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第30-31页 |
| 2.2 实验方法 | 第31-34页 |
| 2.2.1 慢病毒转染 | 第31页 |
| 2.2.2 提取蛋白 | 第31页 |
| 2.2.3 脂质体转染法转染 | 第31-32页 |
| 2.2.4 Western Blot | 第32页 |
| 2.2.5 免疫共沉淀 | 第32页 |
| 2.2.6 免疫荧光及共聚焦激光扫描显微镜观察 | 第32-33页 |
| 2.2.7 克隆形成实验 | 第33页 |
| 2.2.8 RNA提取与real-time RT-PCR | 第33页 |
| 2.2.9 计算机模拟分子对接 | 第33-34页 |
| 3 结果 | 第34-48页 |
| 3.1 AK963抑制人胃癌细胞BGC823、SGC7901、MGC803、MKN-l的增殖 | 第34-36页 |
| 3.2 AK963/40708899下调胃癌细胞细胞周期相关蛋白cyclinBl的表达 | 第36-37页 |
| 3.3 化合物AK963/40708899抑制PAK1活性,通过NF-κB依赖的方式下调cyclinB1的表达,从而引起G2/M细胞周期阻滞 | 第37-38页 |
| 3.4 AK963/40708899抑制人胃癌细胞迁移和侵袭 | 第38-40页 |
| 3.5 AK963抑制胃癌细胞BGC823和SGC7901丝状伪足和促进粘着斑复合体的形成 | 第40-43页 |
| 3.6 AK963/40708899通过抑制PAK1-LIMKl-cofilin信号通路引起细胞骨架重排,抑制胃癌细胞迁移 | 第43-44页 |
| 3.7 AK963/40708899通过抑制PAK1,下游以ERK依赖的方式下调FAK的激酶活性,阻碍细胞迁移 | 第44-45页 |
| 3.8 AK963通过抑制PAK1活性下调MMP9的蛋白和上调Col4A1基因mRNA的表达 | 第45-47页 |
| 3.9 计算机模拟分子对接显示AK963/40708899与PAK1具有较高亲和力 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-50页 |
| 5 结论 | 第50-51页 |
| 第三部分：小分子化合物AK963增强胃癌细胞对化疗药物的敏感性及机制研究 | 第51-62页 |
| 1 前言 | 第51-52页 |
| 2 材料和方法 | 第52-56页 |
| 2.1 主要试剂和仪器 | 第52-54页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第52-53页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第53-54页 |
| 2.2 实验方法 | 第54-56页 |
| 2.2.1 慢病毒转染 | 第54页 |
| 2.2.2 提取蛋白 | 第54-55页 |
| 2.2.3 脂质体转染法转染 | 第55页 |
| 2.2.4 Western Blot | 第55-56页 |
| 2.2.5 MTT细胞增殖实验 | 第56页 |
| 3 结果 | 第56-60页 |
| 3.1 AK963/40708899和紫杉醇联合用药能更有效地抑制人胃癌细胞的增殖 | 第56-58页 |
| 3.1.1 与单独用药相比,联合用药能更有效抑制人胃癌细胞的增殖 | 第56-57页 |
| 3.1.2 联合用药能更有效实现胃癌细胞G2/M期阻滞 | 第57页 |
| 3.1.3 联合用药能更有效诱导细胞出现早期凋亡 | 第57-58页 |
| 3.2 AK963通过PAK1依赖的方式下调微管解聚蛋白stathmin的活性,并通过影响凋亡相关蛋白的表达诱导细胞出现早期凋亡 | 第58-60页 |
| 4 讨论 | 第60-61页 |
| 5 结论 | 第61-62页 |
| 本研究创新性的自我评价 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-68页 |
| 综述 | 第68-79页 |
| 参考文献 | 第74-79页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 个人简历 | 第81页 |
