符号说明 | 第5-9页 |
中文摘要 | 第9-11页 |
Abstract | 第11页 |
1 前言 | 第12-35页 |
1.1 辣椒疫病与辣椒疫霉 | 第13-15页 |
1.1.1 辣椒疫病的发生与防治 | 第13页 |
1.1.2 辣椒疫霉生物学性状 | 第13-14页 |
1.1.3 辣椒疫病病害循环 | 第14页 |
1.1.4 辣椒疫病的发病条件 | 第14页 |
1.1.5 辣椒疫病的防治 | 第14-15页 |
1.2 卵菌效应因子研究进展 | 第15-20页 |
1.3 蛋白结构生物学 | 第20-31页 |
1.3.1 确定研究方向 | 第20页 |
1.3.2 基因扩增 | 第20页 |
1.3.3 目的基因的表达 | 第20-24页 |
1.3.4 蛋白纯化研究进展 | 第24-25页 |
1.3.5 X-射线晶体学 | 第25-28页 |
1.3.6 蛋白质结构测定 | 第28-31页 |
1.4 蛋白与DNA互作 | 第31-32页 |
1.5 RNA-SEQ | 第32-33页 |
1.6 RXLR145研究进展 | 第33-34页 |
1.7 研究目的及意义 | 第34-35页 |
2 材料与方法 | 第35-51页 |
2.1 实验材料 | 第35-38页 |
2.1.1 菌株和载体 | 第35页 |
2.1.2 仪器和耗材 | 第35-36页 |
2.1.3 生化试剂 | 第36页 |
2.1.4 试剂配制 | 第36-38页 |
2.2 实验方法 | 第38-51页 |
2.2.1 生物信息学分析 | 第38-39页 |
2.2.2 基因克隆与表达载体的构建 | 第39-43页 |
2.2.3 重组蛋白的表达 | 第43-45页 |
2.2.4 融合蛋白的纯化 | 第45-46页 |
2.2.5 RXLR145蛋白晶体的生长和优化 | 第46页 |
2.2.6 结构解析 | 第46-47页 |
2.2.7 结构比对 | 第47-48页 |
2.2.8 蛋白特异性结合DNA的筛选及蛋白和DNA结合的一对一验证 | 第48-49页 |
2.2.9 RNA-SEQ | 第49-50页 |
2.2.10 荧光定量PCR | 第50-51页 |
3 结果与分析 | 第51-86页 |
3.1 RXLR145生物信息学分析 | 第51页 |
3.1.1 RXLR145基本理化性质分析 | 第51页 |
3.1.2 RXLR145信号肽的预测 | 第51页 |
3.2 RXLR145基因的克隆与原核表达 | 第51-52页 |
3.3 RXLR145蛋白的纯化 | 第52-55页 |
3.3.1 RXLR145的纯化 | 第52-54页 |
3.3.2 RXLR145硒代蛋白的纯化 | 第54-55页 |
3.4 RXLR145蛋白晶体初筛 | 第55-56页 |
3.5 RXLR145硒代蛋白晶体优化 | 第56-57页 |
3.6 晶体X衍射数据的收集和处理 | 第57-58页 |
3.7 蛋白结构的解析 | 第58-60页 |
3.8 9种RXLR效应因子结构特征分析 | 第60-63页 |
3.9 RXLR145转基因拟南芥CHIP-SEQ | 第63-70页 |
3.10 RXLR145特异性结合序列验证 | 第70-72页 |
3.10.1 凝胶迁移率实验(EMSA)证明RXLR145可以和DNA序列发生特异性结合 | 第70-71页 |
3.10.2 微量热泳动技术(MST)证明RXLR145可以和DNA序列发生特异性结合 | 第71页 |
3.10.3 表明等离子共振技术(SPR)证明RXLR145可以和DNA序列发生特异性结合 | 第71-72页 |
3.11 含有RXLR145的转基因RNA-SEQ | 第72-85页 |
3.11.1 含有RXLR145的转基因RNA-SEQ结果的QRT-PCR验证。 | 第84-85页 |
3.12 含有RXLR145的转基因拟南芥CHIP-SEQ和RNA-SEQ结果综合分析 | 第85-86页 |
4 结论与讨论 | 第86-90页 |
4.1 RXLR效应因子结构特征 | 第86-87页 |
4.2 RXLR效应因子调控机制 | 第87-88页 |
4.3 结论 | 第88-90页 |
参考文献 | 第90-102页 |
附录 | 第102-106页 |
致谢 | 第106-107页 |
博士期间发表论文情况 | 第107页 |