| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第1章 绪论 | 第14-23页 |
| 1.1 水稻花粉发育过程 | 第14页 |
| 1.2 水稻花粉发育相关基因的研究进展 | 第14-15页 |
| 1.3 ABC1基因家族研究进展 | 第15-17页 |
| 1.3.1 ABC1家族起源和研究 | 第15-16页 |
| 1.3.2 水稻ABC1家族的研究 | 第16-17页 |
| 1.4 植物新基因功能的研究策略 | 第17-20页 |
| 1.4.1 对新基因的生物信息学分析 | 第17-18页 |
| 1.4.2 功能失活策略 | 第18-19页 |
| 1.4.2.1 基因敲除 | 第18页 |
| 1.4.2.2 基因沉默 | 第18-19页 |
| 1.4.2.3 T-DNA插入突变技术 | 第19页 |
| 1.4.3 功能获得策略 | 第19-20页 |
| 1.5 转录组学研究进展 | 第20-21页 |
| 1.5.1 RNA-Seq技术 | 第20页 |
| 1.5.2 RNA-Seq技术在植物中的应用 | 第20-21页 |
| 1.6 主要研究目的、意义及技术路线图 | 第21-23页 |
| 第2章 材料与方法 | 第23-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-26页 |
| 2.1.1 水稻材料 | 第23页 |
| 2.1.2 实验所用菌种和载体 | 第23页 |
| 2.1.3 分子生物学相关试剂和抗生素 | 第23页 |
| 2.1.4 主要实验仪器及设备 | 第23-24页 |
| 2.1.5 培养基的配制 | 第24页 |
| 2.1.5.1 用于培养大肠杆菌及根癌农杆菌的培养基 | 第24页 |
| 2.1.5.2 用于水稻组织培养的培养基 | 第24页 |
| 2.1.6 本研究相关溶液和试剂的配制 | 第24-26页 |
| 2.1.6.1 水稻幼苗所用营养液(木村营养液1000×) | 第24-25页 |
| 2.1.6.2 水稻大苗所用营养液(水稻国际营养液) | 第25页 |
| 2.1.6.3 抗生素的配制 | 第25-26页 |
| 2.1.6.4 Gus染色液的配制 | 第26页 |
| 2.1.6.5 分子实验相关试剂的配制 | 第26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-34页 |
| 2.2.1 通过三引物法鉴定纯合突变体 | 第26-27页 |
| 2.2.2 Gus染色方法 | 第27页 |
| 2.2.3 水稻生殖期花粉发育的观察和比较 | 第27页 |
| 2.2.3.1 碘染法测定花粉育性 | 第27页 |
| 2.2.4 回补载体的构建 | 第27-28页 |
| 2.2.5 大肠杆菌的转化 | 第28-29页 |
| 2.2.6 EHA105根癌农杆菌的转化 | 第29页 |
| 2.2.7 根癌农杆菌介导的水稻转基因方法 | 第29-30页 |
| 2.2.7.1 水稻愈伤组织的诱导 | 第29页 |
| 2.2.7.2 根癌农杆菌浸染愈伤组织 | 第29-30页 |
| 2.2.7.3 共培养、筛选、分化、生根 | 第30页 |
| 2.2.8 亚细胞定位方法 | 第30-31页 |
| 2.2.8.1 瞬时表达载体的构建 | 第30页 |
| 2.2.8.2 根癌农杆菌侵染烟草 | 第30-31页 |
| 2.2.9 水稻幼穗总RNA的提取 | 第31页 |
| 2.2.10 构建cDNA文库 | 第31-32页 |
| 2.2.10.1 去除样品中的基因组DNA | 第31-32页 |
| 2.2.10.2 反转录反应 | 第32页 |
| 2.2.11 qRT-PCR | 第32-33页 |
| 2.2.12 相关引物信息 | 第33-34页 |
| 第3章 实验结果与分析 | 第34-50页 |
| 3.1 水稻PFS基因的生物信息学分析 | 第34-37页 |
| 3.1.1 PFS结构预测分析 | 第34-36页 |
| 3.1.2 PFS基因进化树分析 | 第36页 |
| 3.1.3 PFS基因启动子分析 | 第36-37页 |
| 3.2 PPFS基因在水稻花粉发育中时空表达模式分析 | 第37-39页 |
| 3.2.1 pfs纯合突变体的鉴定 | 第37-38页 |
| 3.2.2 水稻中PFS的组织及时期表达模式 | 第38-39页 |
| 3.3 突变体分析 | 第39-41页 |
| 3.3.1 突变体农艺性状分析 | 第39-40页 |
| 3.3.2 突变体花粉育性分析 | 第40-41页 |
| 3.4 回补分析 | 第41-44页 |
| 3.4.1 基因的合成 | 第41-42页 |
| 3.4.2 回补载体的构建、验证和转基因 | 第42-43页 |
| 3.4.3 PFS的功能分析 | 第43-44页 |
| 3.5 亚细胞定位分析 | 第44-45页 |
| 3.6 突变体的转录组分析 | 第45-50页 |
| 3.6.1 突变体转录组分析之差异表达分析 | 第45-47页 |
| 3.6.2 差异基因G0(基因功能)富集分析 | 第47-48页 |
| 3.6.3 差异基因KEGG(代谢通路)富集分析 | 第48-50页 |
| 第4章 讨论 | 第50-52页 |
| 4.1 PFS基因的基本结构和功能分析 | 第50页 |
| 4.2 PFS基因起作用的机制探讨 | 第50-51页 |
| 4.3 展望 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
