| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第12-27页 |
| 1.1 课题的提出 | 第12-14页 |
| 1.2 淀粉代谢综述 | 第14-25页 |
| 1.2.1 植物中淀粉结构 | 第14-15页 |
| 1.2.2 植物中淀粉的合成 | 第15-18页 |
| 1.2.3 淀粉降解综述 | 第18-25页 |
| 1.3 本研究的内容及意义 | 第25-27页 |
| 2 材料与方法 | 第27-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第27-28页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第27页 |
| 2.1.2 菌株及载体 | 第27-28页 |
| 2.1.3 引物 | 第28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-43页 |
| 2.2.1 质粒提取 | 第28页 |
| 2.2.2 RNA提取 | 第28-29页 |
| 2.2.3 cDNA制备 | 第29页 |
| 2.2.4 PCR及qRT-PCR | 第29-31页 |
| 2.2.5 载体构建 | 第31-33页 |
| 2.2.6 酵母转化 | 第33-34页 |
| 2.2.7 酵母文库筛选StBAM9互作蛋白 | 第34-35页 |
| 2.2.8 酵母双杂交(Yeasttwo-hybrid,Y2H)互作验证 | 第35-36页 |
| 2.2.9 互作蛋白的生物信息学分析及转运肽或信号肽预测 | 第36页 |
| 2.2.10 农杆菌热激转化 | 第36页 |
| 2.2.11 农杆菌介导的烟草瞬时表达 | 第36-37页 |
| 2.2.12 双分子荧光互补(BiFC)互作验证 | 第37页 |
| 2.2.13 蛋白的原核表达及纯化 | 第37-38页 |
| 2.2.14 蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB) | 第38-39页 |
| 2.2.15 GST融合蛋白沉降技术(GST pull down)互作验证 | 第39页 |
| 2.2.16 马铃薯块茎淀粉的提取 | 第39-40页 |
| 2.2.17 马铃薯块茎淀粉磷含量的测定 | 第40-41页 |
| 2.2.18 马铃薯块茎直链含量的测定 | 第41-43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-71页 |
| 3.1 StBAM9互作蛋白筛选 | 第43-52页 |
| 3.1.1 以StBAM9或StBAM9-P为饵蛋白进行酵母文库筛选 | 第43-44页 |
| 3.1.2 转化子测序及分析 | 第44-48页 |
| 3.1.3 重要潜在互作蛋白的挑选 | 第48-51页 |
| 3.1.4 Y2H互作验证 | 第51-52页 |
| 3.2 相关基因表达模式分析 | 第52-54页 |
| 3.2.1 RNA提取及cDNA制备 | 第53页 |
| 3.2.2 基因在不同组织及块茎低温处理下的表达模式分析 | 第53-54页 |
| 3.3 StDUF842、StTPR01660、StTPR22129和StTPR45174的亚细胞定位 | 第54-58页 |
| 3.3.1 信号肽或转运肽预测 | 第54-55页 |
| 3.3.2 亚细胞定位载体构建 | 第55页 |
| 3.3.3 StDUF842、StTPR01660、StTPR22129、StTPR45174在本氏烟草中的亚细胞定位 | 第55-58页 |
| 3.4 互作蛋白与StBAM9互作机制探究 | 第58-68页 |
| 3.4.1 蛋白的体外原核表达及GSTpulldown互作验证 | 第59-62页 |
| 3.4.2 BiFC互作位点确证 | 第62-65页 |
| 3.4.3 StTPR01660、StBAM1与StBAM9互作区段的确定 | 第65-68页 |
| 3.5 StBAM9干涉株系淀粉磷含量的测定 | 第68-69页 |
| 3.6 StBAM9干涉株系直链/支链淀粉含量的测定 | 第69-71页 |
| 4 讨论 | 第71-74页 |
| 4.1 TPRdomain蛋白 | 第71页 |
| 4.2 StTPR01660、StTPR22129、StTPR45174的亚细胞定位 | 第71-72页 |
| 4.3 StBAM9降解淀粉的功能机制探究 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-82页 |
| 附录1 本研究常用的引物序列信息 | 第82-89页 |
| 附录2 StBAM1、StBAM9和GmBMY1保守结构域比对 | 第89-90页 |
| 附录3 StBAM9干涉株系中块茎的淀粉磷含量 | 第90-91页 |
| 附录4 StBAM9干涉株系中块茎的直链淀粉和支链淀粉含量 | 第91-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
