| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第7-12页 |
| 第一章 猪繁殖与呼吸综合征的研究进展 | 第12-22页 |
| 1.1 流行病学 | 第12-13页 |
| 1.2 PRRSV病原学特征 | 第13-17页 |
| 1.2.1 PRRSV的致病机制 | 第13页 |
| 1.2.2 PRRSV编码的非结构蛋白 | 第13-16页 |
| 1.2.3 PRRSV的结构蛋白 | 第16-17页 |
| 1.3 PRRSV诊断检测技术的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.3.1 病原学检测 | 第17页 |
| 1.3.2 RT-PCR检测 | 第17页 |
| 1.3.3 酶联免疫吸附测定试验(ELISA) | 第17-18页 |
| 1.3.4 动物试验 | 第18页 |
| 1.4 PRRSV疫苗研究进展 | 第18-21页 |
| 1.4.1 常规疫苗 | 第18-19页 |
| 1.4.2 重组亚单位疫苗 | 第19页 |
| 1.4.3 DNA疫苗 | 第19-20页 |
| 1.4.4 活载体重组疫苗 | 第20页 |
| 1.4.5 基因缺失疫苗 | 第20-21页 |
| 1.4.6 合成肽疫苗 | 第21页 |
| 1.5 选题的目的和意义 | 第21-22页 |
| 第二章 猪繁殖与呼吸综合征病毒GP4蛋白的表达与纯化 | 第22-54页 |
| 2.1 材料 | 第22-26页 |
| 2.1.1 主要仪器设备 | 第22-23页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第23页 |
| 2.1.3 菌株、质粒与血清 | 第23-24页 |
| 2.1.4 主要溶液的配制 | 第24-26页 |
| 2.1.5 引物设计 | 第26页 |
| 2.2 PRRSV GP4表达载体的构建 | 第26-33页 |
| 2.2.1 细胞培养与病毒分离 | 第26-27页 |
| 2.2.2 PRRSV GP4目的基因的扩增 | 第27-30页 |
| 2.2.3 PRRSV GP4重组克隆载体的构建 | 第30-32页 |
| 2.2.4 PRRSV GP4原核表达载体的构建 | 第32-33页 |
| 2.3 PRRSV GP4的诱导表达与纯化 | 第33-39页 |
| 2.3.1 pET-28a-SUMO-GP4的诱导表达 | 第33-34页 |
| 2.3.2 重组蛋白SUMO-GP4的SDS-PAGE分析 | 第34-35页 |
| 2.3.3 重组蛋白SUMO-GP4的Western Blot鉴定 | 第35-36页 |
| 2.3.4 重组蛋白SUMO-GP4的可溶性分析 | 第36页 |
| 2.3.5 重组蛋白SUMO-GP4诱导条件的优化 | 第36-37页 |
| 2.3.6 可溶性重组蛋白的制备与纯化 | 第37-38页 |
| 2.3.7 目的蛋白GP4的纯化 | 第38-39页 |
| 2.4 结果与分析 | 第39-49页 |
| 2.4.1 PRRSV GP4 PCR结果 | 第39页 |
| 2.4.2 pMD19-T-GP4重组载体的构建 | 第39-41页 |
| 2.4.3 pET-28a-SUMO-GP4重组表达载体的构建 | 第41-42页 |
| 2.4.4 重组蛋白SUMO-GP4的SDS-PAGE初步鉴定 | 第42页 |
| 2.4.5 重组蛋白SUMO-GP4可溶性分析 | 第42-43页 |
| 2.4.6 重组蛋白SUMO-GP4温度优化 | 第43-44页 |
| 2.4.7 重组蛋白SUMO-GP4时间优化 | 第44-45页 |
| 2.4.8 重组蛋白SUMO-GP4IPTG浓度优化 | 第45-46页 |
| 2.4.9 重组蛋白SUMO-GP4纯化结果 | 第46-47页 |
| 2.4.10 重组蛋白SUMO-GP4的Western Blot鉴定 | 第47页 |
| 2.4.11 目的蛋白GP4的SDS-PAGE分析 | 第47-48页 |
| 2.4.12 目的蛋白GP4纯化SDS-PAGE结果 | 第48-49页 |
| 2.4.13 目的蛋白GP4的Western Blot鉴定 | 第49页 |
| 2.5 讨论 | 第49-52页 |
| 2.5.1 表达载体的选择 | 第49页 |
| 2.5.2 原核表达载体的构建 | 第49-50页 |
| 2.5.3 目的蛋白的诱导表达 | 第50-51页 |
| 2.5.4 蛋白的检测 | 第51页 |
| 2.5.5 蛋白的纯化 | 第51-52页 |
| 2.6 小结 | 第52-54页 |
| 第三章 结论 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-64页 |
| 致谢 | 第64-66页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第66-67页 |
