| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩写词及英汉对照表 | 第10-11页 |
| 引言 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-23页 |
| 1.1 翻译起始因子eIF4E与eIF(iso)4E结构与功能 | 第12-15页 |
| 1.1.1 翻译起始因子eIF4E的结构 | 第12页 |
| 1.1.2 翻译起始因子启动细胞内mRNA的翻译 | 第12-13页 |
| 1.1.3 翻译起始因子eIF4E和eIF(iso)4E的差异性与功能冗余 | 第13-14页 |
| 1.1.4 马铃薯Y病毒属病毒选择利用翻译起始因子 | 第14-15页 |
| 1.1.5 植物内源eIF4E或eIF(iso)4E缺陷与马铃薯Y病毒属病毒抗性相关 | 第15页 |
| 1.2 马铃薯Y病毒概述 | 第15-18页 |
| 1.2.1 马铃薯Y病毒结构 | 第15-16页 |
| 1.2.2 马铃薯Y病毒的株系及病症 | 第16-17页 |
| 1.2.3 马铃薯Y病毒对新疆加工番茄的危害 | 第17页 |
| 1.2.4 番茄PVY抗性品种培育进展 | 第17-18页 |
| 1.3 CRISPR/Cas系统在植物体中的应用 | 第18-23页 |
| 1.3.1 CRISPR/Cas系统的起源及发展史 | 第18-19页 |
| 1.3.2 CRISPR/CaS系统的结构与功能 | 第19-21页 |
| 1.3.3 CRISPR/CaS系统的应用 | 第21-22页 |
| 1.3.4 基于CRISPR/Cas9基因组编辑系统的突变体检测 | 第22-23页 |
| 第二章 加工番茄eIF4E靶向编辑载体的构建 | 第23-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-24页 |
| 2.1.1 菌株与载体 | 第23页 |
| 2.1.2 主要实验试剂 | 第23页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第23-24页 |
| 2.1.4 主要实验试剂和培养基的配置 | 第24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-32页 |
| 2.2.1 靶序列的PCR引物设计 | 第24页 |
| 2.2.2 引物退火方式合成靶序列 | 第24-25页 |
| 2.2.3 靶序列与pUC-sgRNA的连接 | 第25-26页 |
| 2.2.4 连接产物热击转化DH5α | 第26页 |
| 2.2.5 菌落PCR鉴定阳性克隆并测序 | 第26-27页 |
| 2.2.6 SDS碱裂解法提取阳性克隆质粒 | 第27-28页 |
| 2.2.7 p1302-sgRNA-Cas9-eIF4E1/eIF4E2/eIF(iso)4E载体的构建 | 第28-30页 |
| 2.2.8 pBp35S-sgRNA-Cas9-eIF4E1/eIF4E2/eIF(iso)4E载体的构建 | 第30-31页 |
| 2.2.9 已构建载体电击转化农杆菌GV3101 | 第31-32页 |
| 2.3 结果和分析 | 第32-37页 |
| 2.3.1 靶序列的选取 | 第32-33页 |
| 2.3.2 中间载体pUC-sgRNA-eIF4E1/eIF4E2/eIF(iso)4E的鉴定 | 第33-34页 |
| 2.3.3 p1302-sgRNA-Cas9-eIF4E1/eIF4E2/eIF(iso)4E 载体的鉴定 | 第34-35页 |
| 2.3.4 pBp35S-sgRNA-Cas9-eIF4E1/eIF4E2/eIF(iso)4E载体的鉴定 | 第35-36页 |
| 2.3.5 CRISPR/Cas9重组载体转化农杆菌后菌落的PCR鉴定 | 第36-37页 |
| 第三章 瞬时转化验证eIF4E靶向编辑载体 | 第37-44页 |
| 3.1 实验材料 | 第37页 |
| 3.1.1 菌株与植物材料 | 第37页 |
| 3.1.2 主要实验试剂 | 第37页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第37页 |
| 3.1.4 主要实验试剂和培养基的配置 | 第37页 |
| 3.2 实验方法 | 第37-41页 |
| 3.2.1 无菌苗的种植 | 第37-38页 |
| 3.2.2 瞬时转化浸染液的制备 | 第38页 |
| 3.2.3 瞬时转化过程 | 第38页 |
| 3.2.4 靶序列突变检测 | 第38-41页 |
| 3.3 结果和分析 | 第41-44页 |
| 3.3.1 靶序列突变检测 | 第41-42页 |
| 3.3.2 突变位点核苷酸序列比对 | 第42-43页 |
| 3.3.3 突变位点氨基酸序列比对 | 第43-44页 |
| 第四章 eIF4E靶向编辑载体遗传转化加工番茄 | 第44-51页 |
| 4.1 实验材料 | 第44页 |
| 4.1.1 菌株与植物材料 | 第44页 |
| 4.1.2 主要实验试剂 | 第44页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第44页 |
| 4.1.4 主要实验试剂和培养基的配置 | 第44页 |
| 4.2 实验方法 | 第44-48页 |
| 4.2.1 加工番茄无菌苗的培育 | 第44-45页 |
| 4.2.2 遗传转化浸染液的制备 | 第45页 |
| 4.2.3 遗传转化过程 | 第45-46页 |
| 4.2.4 PCR检测阳性转基因植株 | 第46-48页 |
| 4.2.5 阳性植株的突变情况检测 | 第48页 |
| 4.3 结果与分析 | 第48-51页 |
| 4.3.1 植物表达载体的遗传转化 | 第48-49页 |
| 4.3.2 遗传转化所获植株的PCR检测 | 第49-50页 |
| 4.3.3 转基因植株的突变情况检测 | 第50-51页 |
| 第五章 讨论与展望 | 第51-54页 |
| 5.1 加工番茄eIF4E靶向编辑载体的构建 | 第51页 |
| 5.2 瞬时转化验证eIF4E靶向编辑载体 | 第51-52页 |
| 5.3 eIF4E靶向编辑载体遗传转化加工番茄 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-64页 |
| 附录 | 第64-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 作者简介 | 第68-69页 |
| 石河子大学硕士研究生学位论文导师评阅表 | 第69页 |
