| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 第一章 引言 | 第15-27页 |
| 1.1 羊泰勒虫概述 | 第15-18页 |
| 1.1.1 病原 | 第15-16页 |
| 1.1.2 生活史 | 第16页 |
| 1.1.3 流行病学 | 第16-17页 |
| 1.1.4 临床和病理特征 | 第17页 |
| 1.1.5 治疗和预防 | 第17-18页 |
| 1.2 抗泰勒虫疫苗研究进展 | 第18-24页 |
| 1.2.1 灭活疫苗 | 第18页 |
| 1.2.2 强毒活疫苗 | 第18-19页 |
| 1.2.3 弱毒活疫苗 | 第19-20页 |
| 1.2.3.1 从自然界筛选弱毒株 | 第19页 |
| 1.2.3.2 传代驯化致弱 | 第19-20页 |
| 1.2.3.3 物理或化学致弱 | 第20页 |
| 1.2.4 亚单位疫苗和DNA疫苗 | 第20-24页 |
| 1.2.4.1 子孢子表面抗原 | 第21-22页 |
| 1.2.4.2 裂殖体表面抗原 | 第22-23页 |
| 1.2.4.3 裂殖子表面抗原 | 第23-24页 |
| 1.2.4.4 配子体表面抗原 | 第24页 |
| 1.3 毕赤酵母表达系统 | 第24-25页 |
| 1.4 研究内容和目的 | 第25-27页 |
| 第二章 吕氏泰勒虫TlSP基因的克隆和序列分析 | 第27-38页 |
| 2.1 材料 | 第27-28页 |
| 2.1.1 虫株、菌株及质粒 | 第27页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第27页 |
| 2.1.3 主要仪器耗材 | 第27页 |
| 2.1.4 培养基及溶液配方 | 第27-28页 |
| 2.2 方法 | 第28-31页 |
| 2.2.1 虫体总RNA的提取与cDNA第一链的合成 | 第28页 |
| 2.2.2 吕氏泰勒虫TlSP基因的扩增 | 第28-29页 |
| 2.2.3 TlSP基因与pGEM-T Easy载体的连接与转化 | 第29页 |
| 2.2.4 吕氏泰勒虫TlSP基因的序列比对分析 | 第29页 |
| 2.2.5 吕氏泰勒虫TlSP基因的生物信息学分析 | 第29页 |
| 2.2.6 吕氏泰勒虫TlSP基因免疫优势区域的扩增 | 第29-30页 |
| 2.2.7 TlSP基因免疫优势区域与pGEM-T Easy载体的连接与转化 | 第30-31页 |
| 2.3 结果 | 第31-37页 |
| 2.3.1 虫体总RNA的提取 | 第31页 |
| 2.3.2 TlSP基因及其免疫优势区的扩增 | 第31页 |
| 2.3.3 吕氏泰勒虫TlSP基因序列比对 | 第31-34页 |
| 2.3.4 吕氏泰勒虫TlSP的生物信息学分析 | 第34-37页 |
| 2.3.4.1 TlSP的跨膜区与结构分析 | 第34-35页 |
| 2.3.4.2 TlSP的抗原性分析 | 第35-36页 |
| 2.3.4.3 TlSP的糖基化位点与磷酸化位点分析 | 第36-37页 |
| 2.4 讨论 | 第37-38页 |
| 第三章 吕氏泰勒虫TlSP基因在毕赤酵母中的分泌表达 | 第38-50页 |
| 3.1 材料 | 第38-39页 |
| 3.1.1 菌株及质粒 | 第38页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第38页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第38页 |
| 3.1.4 培养基及溶液配方 | 第38-39页 |
| 3.2 方法 | 第39-43页 |
| 3.2.1 真核表达质粒pPIC9K-TlSP的构建 | 第39-40页 |
| 3.2.2 重组质粒pPIC9K-TlSP的线性化 | 第40页 |
| 3.2.3 毕赤酵母感受态细胞的制备 | 第40-41页 |
| 3.2.4 重组质粒pPIC9K-TlSP的电击转化 | 第41页 |
| 3.2.5 遗传霉素(G418)筛选多拷贝插入转化子 | 第41页 |
| 3.2.6 菌落PCR分析重组质粒在毕赤酵母中的整合 | 第41-42页 |
| 3.2.7 重组TlSP Mut~+和Mut~s的分泌表达 | 第42-43页 |
| 3.2.8 重组TlSP的大量表达和制备 | 第43页 |
| 3.2.9 重组TlSP的反应原性分析 | 第43页 |
| 3.3 结果 | 第43-48页 |
| 3.3.1 真核表达质粒pPIC9K-TlSP的酶切鉴定 | 第43页 |
| 3.3.2 MD平板筛选His~+转化子 | 第43-44页 |
| 3.3.3 遗传霉素筛选高拷贝插入转化子 | 第44-45页 |
| 3.3.4 PCR分析TlSP基因在毕赤酵母基因组的整合情况 | 第45-46页 |
| 3.3.5 pPIC9K-TlSP在GS115/Mut~+和KM71/Mut~s中的表达及鉴定 | 第46-47页 |
| 3.3.6 重组蛋白TlSP的制备及反应原性分析 | 第47-48页 |
| 3.4 讨论 | 第48-50页 |
| 第四章 重组TlSP亚单位疫苗的免疫效果评估 | 第50-64页 |
| 4.1 材料 | 第50-51页 |
| 4.1.1 试验羊及媒介蜱 | 第50页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第50页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第50-51页 |
| 4.1.4 溶液及配方 | 第51页 |
| 4.2 方法 | 第51-55页 |
| 4.2.0 试验绵羊血液基因组的提取 | 第51页 |
| 4.2.1 野外蜱基因组的提取 | 第51-52页 |
| 4.2.2 免疫前试验绵羊和野外蜱的泰勒虫检测 | 第52-53页 |
| 4.2.3 TlSP重组亚单位疫苗的制备 | 第53页 |
| 4.2.3.1 重组TlSP的透析、浓缩和定量 | 第53页 |
| 4.2.3.2 疫苗的制备 | 第53页 |
| 4.2.4 免疫程序及攻蜱试验 | 第53-54页 |
| 4.2.5 试验绵羊样品和数据的收集 | 第54页 |
| 4.2.6 试验绵羊抗体效价和细胞因子的测定 | 第54页 |
| 4.2.6.1 试验绵羊抗体效价的测定 | 第54页 |
| 4.2.6.2 试验绵羊IL-2、IL-4和IFN-γ的测定 | 第54页 |
| 4.2.7 T淋巴细胞增殖试验 | 第54-55页 |
| 4.2.7.1 PMBC的分离 | 第54-55页 |
| 4.2.7.2 T淋巴细胞增殖试验 | 第55页 |
| 4.3 结果 | 第55-62页 |
| 4.3.1 免疫前试验绵羊和野外蜱的泰勒虫检测 | 第55-56页 |
| 4.3.2 重组TlSP的定量和亚单位疫苗的制备 | 第56-57页 |
| 4.3.3 攻蜱后试验绵羊的临床症状 | 第57页 |
| 4.3.4 攻蜱后试验绵羊的体温情况 | 第57页 |
| 4.3.5 攻蜱后试验绵羊的染虫率 | 第57-59页 |
| 4.3.6 攻蜱后试验绵羊的血相变化 | 第59页 |
| 4.3.7 免疫后试验绵羊抗体水平的检测 | 第59-60页 |
| 4.3.8 亚单位疫苗刺激T细胞的增殖效果 | 第60-61页 |
| 4.3.9 免疫后试验绵羊细胞因子的检测 | 第61-62页 |
| 4.4 讨论 | 第62-64页 |
| 第五章 全文结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-77页 |
| 附录 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 作者简介 | 第79页 |
