| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第11-27页 |
| 1.1 极地微生物简介 | 第11页 |
| 1.2 极地微生物基因组及基因资源研究简况 | 第11-13页 |
| 1.3 天然产物 | 第13-21页 |
| 1.3.1 天然产物主要类别及其生物合成简述 | 第13-20页 |
| 1.3.2 天然产物的新型挖掘方式 | 第20-21页 |
| 1.4 天然产物生物合成基因簇挖掘的遗传操作体系 | 第21-25页 |
| 1.4.1 生物合成基因簇的RecE/T和Redα/β克隆 | 第21-25页 |
| 1.4.2 生物合成基因簇的属间接合转移 | 第25页 |
| 1.5 立题依据和意义 | 第25-27页 |
| 第二章 5株极地海洋放线菌天然产物合成潜力分析 | 第27-46页 |
| 2.1 前言 | 第27页 |
| 2.2 材料与方法 | 第27-28页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第27-28页 |
| 2.2.1.1 菌株及来源 | 第27-28页 |
| 2.2.1.2 生物信息分析工具 | 第28页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第28页 |
| 2.2.2.1 基因组测序 | 第28页 |
| 2.2.2.2 生物合成基因簇分析 | 第28页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第28-44页 |
| 2.3.1 5株极地海洋放线菌天然产物合成潜力分析 | 第28-34页 |
| 2.3.2 604F27生物合成基因簇分析 | 第34-40页 |
| 2.3.3 527F15生物合成基因簇分析 | 第40-42页 |
| 2.3.4 502F10生物合成基因簇分析 | 第42-44页 |
| 2.4 本章小结 | 第44-46页 |
| 第三章 生物合成基因簇克隆与属间接合转移 | 第46-76页 |
| 3.1 前言 | 第46页 |
| 3.2 材料与方法 | 第46-68页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第46-53页 |
| 3.2.1.1 菌株及质粒 | 第46-48页 |
| 3.2.1.2 主要实验仪器 | 第48-49页 |
| 3.2.1.3 培养基和抗生素 | 第49-50页 |
| 3.2.1.4 引物合成和DNA测序 | 第50-51页 |
| 3.2.1.5 常用生物学试剂和溶液及缓冲液 | 第51-52页 |
| 3.2.1.6 DNA序列分析工具 | 第52-53页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第53-61页 |
| 3.2.2.1 生物合成基因簇RecE/T和Redα/β克隆的操作步骤及要点 | 第53页 |
| 3.2.2.2 细菌基因组DNA的提取 | 第53-54页 |
| 3.2.2.3 质粒DNA的小量提取 | 第54-55页 |
| 3.2.2.4 PCR反应体系 | 第55-56页 |
| 3.2.2.5 酶切体系 | 第56-59页 |
| 3.2.2.6 T4 DNA聚合酶反应体系 | 第59页 |
| 3.2.2.7 电转化操作方案 | 第59-61页 |
| 3.2.3 质粒pBeloBAC11-604F27-phiC31-oriT-attp的构建 | 第61-62页 |
| 3.2.4 质粒pBR322-527F15-phiC31-oriT-attp的构建 | 第62-63页 |
| 3.2.5 质粒p15A-502F10-phiC31-oriT-attp的构建 | 第63-67页 |
| 3.2.6 属间接合转移 | 第67-68页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第68-75页 |
| 3.3.1 604F27生物合成基因簇克隆与属间接合转移 | 第68-69页 |
| 3.3.2 527F15生物合成基因簇克隆与属间接合转移 | 第69-72页 |
| 3.3.3 502F10生物合成基因簇克隆与属间接合转移 | 第72-75页 |
| 3.4 本章小结 | 第75-76页 |
| 第四章 生物合成基因簇的异源表达与产物分析 | 第76-95页 |
| 4.1 前言 | 第76页 |
| 4.2 材料与方法 | 第76-84页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第76-80页 |
| 4.2.1.1 菌株 | 第76页 |
| 4.2.1.2 主要实验仪器 | 第76-77页 |
| 4.2.1.3 培养基和抗生素 | 第77-78页 |
| 4.2.1.4 引物合成和DNA测序 | 第78-79页 |
| 4.2.1.5 常用生物学试剂和有机溶剂 | 第79-80页 |
| 4.2.2 实验方法 | 第80-84页 |
| 4.2.2.1 生物合成基因簇的异源表达 | 第80页 |
| 4.2.2.2 RNA的提取 | 第80-81页 |
| 4.2.2.3 cDNA合成及其PCR | 第81页 |
| 4.2.2.4 发酵产物的提取与分析 | 第81-84页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第84-94页 |
| 4.3.1. Streptomyces coelicolor M1154+604F27表达与产物分析 | 第84-89页 |
| 4.3.2. Streptomyces coelicolor M1154+527F15表达与产物分析 | 第89-91页 |
| 4.3.3. Streptomyces coelicolor M1154+502F10表达与产物分析 | 第91-94页 |
| 4.4 本章小结 | 第94-95页 |
| 第五章 总结与展望 | 第95-97页 |
| 5.1 总结 | 第95页 |
| 5.2 创新点 | 第95-96页 |
| 5.3 后续研究与展望 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-106页 |
| 致谢 | 第106-107页 |
| 硕士期间发表论文 | 第107页 |
