| 摘要 | 第4-8页 |
| ABSTRACT | 第8-12页 |
| 目录 | 第13-17页 |
| 缩略语 | 第17-18页 |
| 1 前言 | 第18-32页 |
| 1.1 淡水涡虫简介 | 第18-19页 |
| 1.2 饥饿对涡虫组织结构、细胞形态和基因表达的影响 | 第19-21页 |
| 1.2.1 涡虫生长和退行生长 | 第19-20页 |
| 1.2.2 饥饿对涡虫组织结构和细胞形态的影响 | 第20页 |
| 1.2.3 饥饿对涡虫干细胞及干细胞相关基因表达的影响 | 第20-21页 |
| 1.3 饥饿生理学研究进展 | 第21-25页 |
| 1.3.1 饥饿对动物体重和组织器官结构的影响 | 第22-23页 |
| 1.3.2 饥饿对动物生理代谢的影响 | 第23-25页 |
| 1.4 饥饿诱导的细胞死亡方式及其分子机制 | 第25-29页 |
| 1.4.1 细胞自溶及其演变和发展 | 第25-27页 |
| 1.4.2 细胞自噬及其分子机制 | 第27-28页 |
| 1.4.3 饥饿诱导细胞凋亡的分子机制 | 第28-29页 |
| 1.5 课题提出的意义和主要研究内容 | 第29-32页 |
| 2 材料与方法 | 第32-58页 |
| 2.0 实验动物及处理 | 第32页 |
| 2.1 主要仪器 | 第32-33页 |
| 2.2 主要试剂及配制 | 第33-34页 |
| 2.3 实验方法 | 第34-58页 |
| 2.3.1 石蜡切片制备和HE染色 | 第34-35页 |
| 2.3.2 透射电镜样品制备 | 第35页 |
| 2.3.3 蛋白质浓度的测定 | 第35-36页 |
| 2.3.4 SDS-PAGE电泳 | 第36-37页 |
| 2.3.5 Western-blot | 第37-38页 |
| 2.3.6 转氨酶、乳酸脱氢酶和肌酸激酶活性的测定 | 第38页 |
| 2.3.7 丙二醛含量、超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性的测定 | 第38页 |
| 2.3.8 磷酸酶活性电泳 | 第38-39页 |
| 2.3.9 蛋白水解酶活性电泳 | 第39页 |
| 2.3.10 总RNA提取和cDNA合成 | 第39-40页 |
| 2.3.11 半定量PCR检测PCNA mRNA的表达变化 | 第40-41页 |
| 2.3.12 基因组DNA提取 | 第41-42页 |
| 2.3.13 质粒DNA提取 | 第42-43页 |
| 2.3.14 JM109和BL21感受态细胞的制备 | 第43页 |
| 2.3.15 mRNA差异显示技术筛选饥饿诱导上调表达的ESTs | 第43-44页 |
| 2.3.16 cDNA片段的纯化、克隆载体的连接及转化 | 第44-45页 |
| 2.3.17 双向电泳-差异蛋白质组学分析 | 第45-46页 |
| 2.3.18 DjHSP90 cDNA全长克隆 | 第46-47页 |
| 2.3.19 DjGRP78 cDNA全长克隆 | 第47-48页 |
| 2.3.20 DjHSP40 cDNA全长克隆 | 第48-49页 |
| 2.3.21 实时荧光定量PCR | 第49-50页 |
| 2.3.22 DjHSP90抗血清制备 | 第50-54页 |
| 2.3.23 DjHSP70抗血清制备 | 第54-56页 |
| 2.3.24 免疫组化技术 | 第56-57页 |
| 2.3.25 细胞大小的测量 | 第57页 |
| 2.3.26 涡虫整体免疫组化技术 | 第57-58页 |
| 3 结果 | 第58-94页 |
| 3.1 持久饥饿对日本三角涡虫组织结构、细胞形态的影响 | 第58-62页 |
| 3.2 持久饥饿对日本三角涡虫体内6种酶活性的影响 | 第62-64页 |
| 3.2.1 持久饥饿对日本三角涡虫转氨酶活性的影响 | 第62页 |
| 3.2.2 持久饥饿对日本三角涡虫磷酸酶活性的影响 | 第62-63页 |
| 3.2.3 持久饥饿对日本三角涡虫蛋白水解酶活性的影响 | 第63页 |
| 3.2.4 持久饥饿对日本三角涡虫肌酸激酶和乳酸脱氢酶活性的影响 | 第63-64页 |
| 3.3 持久饥饿对日本三角涡虫干细胞标志基因PCNA表达的影响 | 第64-65页 |
| 3.4 持久饥饿诱导日本三角涡虫上调表达基因的筛选 | 第65-67页 |
| 3.5 持久饥饿诱导日本三角涡虫上调表达蛋白质的筛选 | 第67-70页 |
| 3.6 持久饥饿诱导日本三角涡虫氧化和抗氧化性损伤研究 | 第70-71页 |
| 3.7 日本三角涡虫 DJHSP90/DJGRP78/DJHSP40基因克隆及表达模式 | 第71-85页 |
| 3.7.1 日本三角涡虫 DjHSP90 基因克隆及生物信息学分析 | 第71-76页 |
| 3.7.2 日本三角涡虫DjGRP78基因克隆及生物信息学分析 | 第76-79页 |
| 3.7.3 日本三角涡虫 DjHSP40 基因克隆及生物信息学分析 | 第79-83页 |
| 3.7.4 持久饥饿对DjHSP90、DjGRP78和DjHSP40基因表达的影响 | 第83-85页 |
| 3.8 日本三角涡虫DJHSP90抗血清的制备及原位表达 | 第85-88页 |
| 3.8.1 DjHSP90 C-端多肽表达载体的构建与诱导表达 | 第85-86页 |
| 3.8.2 DjHSP90 C-端多肽融合蛋白的纯化结果 | 第86页 |
| 3.8.3 DjHSP90抗血清特异性检测结果 | 第86-87页 |
| 3.8.4 日本三角涡虫DjHSP90在饥饿涡虫体内的表达模式 | 第87-88页 |
| 3.9 日本三角涡虫DJHSP70抗血清的制备及原位表达 | 第88-94页 |
| 3.9.1 DjHSP70表达载体的构建 | 第88页 |
| 3.9.2 DjHSP70原核表达诱导条件优化 | 第88-89页 |
| 3.9.3 DjHSP70抗血清特异性检测结果 | 第89-90页 |
| 3.9.4 日本三角涡虫DjHSP70在饥饿涡虫体内的表达模式 | 第90-94页 |
| 4 讨论 | 第94-104页 |
| 4.1 持久饥饿对日本三角涡虫组织结构、细胞形态的影响分析 | 第94-96页 |
| 4.2 持久饥饿对日本三角涡虫生化代谢的影响分析 | 第96-98页 |
| 4.3 持久饥饿诱导日本三角涡虫氧化和抗氧化性损伤的影响分析 | 第98-99页 |
| 4.4 持久饥饿对日本三角涡虫干细胞相关基因表达的影响分析 | 第99-100页 |
| 4.5 持久饥饿诱导日本三角涡虫热休克蛋白表达的生理意义 | 第100-102页 |
| 4.6 持久饥饿、氧化性损伤、细胞死亡和细胞应激反应之间的关系 | 第102-104页 |
| 5 结论 | 第104-106页 |
| 参考文献（REFERENCES） | 第106-128页 |
| 致谢 | 第128-130页 |
| 攻读博士学位期间参加的科研项目和取得的研究成果清单 | 第130-131页 |
