| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-15页 |
| 文献综述 | 第15-55页 |
| 第一章 胚胎干细胞分离与体细胞核重编程策略 | 第15-23页 |
| ·小鼠与人胚胎干细胞分离的研究 | 第16-17页 |
| ·小鼠胚胎干细胞的分离 | 第16-17页 |
| ·人胚胎干细胞的分离 | 第17页 |
| ·牛胚胎干细胞的研究概况 | 第17-18页 |
| ·由体细胞核重编程为多能干细胞的策略 | 第18-22页 |
| ·核移植策略 | 第19-20页 |
| ·体细胞与ES细胞融合策略 | 第20-21页 |
| ·体细胞培养条件下自发重编程策略 | 第21-22页 |
| ·转录因子诱导策略 | 第22页 |
| ·胚胎干细胞应用中存在的问题及展望 | 第22-23页 |
| 第二章 诱导型多能干细胞(iPSCs)的研究进展 | 第23-38页 |
| ·转录因子的选择 | 第23-27页 |
| ·导入外源基因的途径 | 第27-28页 |
| ·靶细胞的选择 | 第28-29页 |
| ·iPS细胞的基因表达及表观遗传修饰 | 第29-30页 |
| ·iPS细胞诱导和培养条件 | 第30-32页 |
| ·iPS细胞的鉴定 | 第32-35页 |
| ·体细胞重编程效率 | 第35-36页 |
| ·iPS细胞在医学方面的应用前景 | 第36-38页 |
| 第三章 sox2基因和klf4基因的研究进展 | 第38-48页 |
| ·sox2基因的发现及功能研究 | 第38-43页 |
| ·sox2基因的发现 | 第38-39页 |
| ·sox基因家族与SOX蛋白 | 第39-41页 |
| ·sox2基因在体内外的表达情况 | 第41页 |
| ·Sox2转录因子在干细胞维持与增殖中的作用 | 第41-42页 |
| ·Sox2转录因子在iPSCs研究中的作用 | 第42-43页 |
| ·klf4基因的发现及功能研究 | 第43-48页 |
| ·klf基因家族及klf4基因的发现 | 第43-44页 |
| ·klf4基因及其蛋白序列 | 第44页 |
| ·KLF4的分子作用机制 | 第44-46页 |
| ·KLF4在干细胞自我更新及体细胞核重编程中的作用 | 第46-48页 |
| 第四章 羊膜脱细胞基质的特性与应用进展 | 第48-55页 |
| ·羊膜的来源 | 第48页 |
| ·羊膜的组织结构 | 第48-49页 |
| ·羊膜的生物学特性 | 第49-51页 |
| ·羊膜的物理特性 | 第49-50页 |
| ·羊膜的抗炎与抗菌性 | 第50页 |
| ·羊膜的低免疫原性 | 第50-51页 |
| ·羊膜生物支架的制备与保存 | 第51-53页 |
| ·新鲜完整羊膜的制备 | 第51页 |
| ·脱细胞羊膜的制备 | 第51-52页 |
| ·新鲜完整羊膜与脱细胞羊膜的比较 | 第52页 |
| ·羊膜的保存与使用前处理 | 第52页 |
| ·保存方法对羊膜特性的影响 | 第52-53页 |
| ·羊膜作为生物支架的应用 | 第53-55页 |
| 试验研究 | 第55-95页 |
| 第五章 牛sox2和klf4基因的克隆及重组反转录病毒载体的构建 | 第55-71页 |
| ·材料与方法 | 第56-61页 |
| ·试验材料 | 第56页 |
| ·主要试验仪器 | 第56页 |
| ·牛sox2和klf4基因的引物设计与克隆 | 第56-58页 |
| ·重组pMD18-T载体的构建、鉴定与测序 | 第58-60页 |
| ·重组反转录病毒载体的构建与鉴定 | 第60页 |
| ·PT67和NIH3T3的G418最小致死量测定 | 第60-61页 |
| ·病毒颗粒的包装及产毒细胞株的建立 | 第61页 |
| ·测定重组病毒滴度 | 第61页 |
| ·结果 | 第61-68页 |
| ·牛sox2和klf4基因的克隆 | 第61-62页 |
| ·重组pT-sox2质粒和pT-klf4质粒的构建、酶切鉴定与测序 | 第62-64页 |
| ·重组反转录病毒载体pMS和pMK的构建与鉴定 | 第64-66页 |
| ·产毒细胞株的建立 | 第66-67页 |
| ·重组病毒滴度测定 | 第67-68页 |
| ·讨论 | 第68-70页 |
| ·小结 | 第70-71页 |
| 第六章 转录因子诱导新生牛皮肤成纤维细胞为牛iPS细胞 | 第71-86页 |
| ·材料与方法 | 第71-77页 |
| ·主要试验仪器与试剂及其配制 | 第71-72页 |
| ·新生牛皮肤成纤维细胞分离培养 | 第72-73页 |
| ·NBF细胞生长曲线绘制 | 第73页 |
| ·人羊膜脱细胞基质的制备 | 第73-74页 |
| ·转录因子OSCK组合诱导新生牛皮肤成纤维细胞 | 第74页 |
| ·病毒感染后的细胞培养与集落形成 | 第74页 |
| ·牛iPS-NBF生长行为测定 | 第74-75页 |
| ·AKP活性及分子标记检测 | 第75-76页 |
| ·定量PCR方法分析牛iPS-NBF细胞特定因子表达 | 第76-77页 |
| ·减少或增加转录因子对诱导效率的影响 | 第77页 |
| ·结果 | 第77-83页 |
| ·新生牛皮肤成纤维(NBF)细胞分离培养及特性 | 第77页 |
| ·羊膜支架的制备 | 第77-78页 |
| ·病毒感染后细胞形态与集落形态 | 第78-79页 |
| ·牛iPS-NBF细胞的生长曲线、核型 | 第79-80页 |
| ·分子标记检测结果 | 第80-81页 |
| ·定量PCR分析有关基因的表达水平 | 第81-82页 |
| ·不同因子组合诱导效率比较 | 第82-83页 |
| ·讨论 | 第83-85页 |
| ·关于饲养层的选择与iPS细胞的扩增 | 第83页 |
| ·牛iPS-NBF细胞与牛ES细胞表面特异分子标记的比较 | 第83-84页 |
| ·关于减少或增加转录因子对诱导效率的影响 | 第84-85页 |
| ·小结 | 第85-86页 |
| 第七章 牛iPS-NBF细胞多能性检测研究 | 第86-95页 |
| ·材料与方法 | 第86-90页 |
| ·主要试剂与材料 | 第86页 |
| ·主要仪器 | 第86页 |
| ·牛iPS-NBF细胞体外分化能力检测 | 第86-88页 |
| ·牛iPS-NBF细胞体内分化能力检测 | 第88页 |
| ·牛iPS-NBF细胞嵌合能力检测(牛-小鼠嵌合) | 第88-90页 |
| ·结果 | 第90-93页 |
| ·牛iPS-NBF细胞的体外分化能力 | 第90-91页 |
| ·牛iPS-NBF细胞形成畸胎瘤的能力 | 第91-92页 |
| ·牛-鼠嵌合体的形成 | 第92-93页 |
| ·讨论 | 第93-94页 |
| ·小结 | 第94-95页 |
| 结论 | 第95-96页 |
| 创新之处和进一步研究的课题 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-110页 |
| 附录 | 第110-115页 |
| 缩略词 | 第115-117页 |
| 致谢 | 第117-118页 |
| 作者简介 | 第118页 |
