| 中文摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 符号说明 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-21页 |
| 1 G蛋白偶联受体 | 第10-13页 |
| 1.1 G蛋白偶联受体的结构 | 第10页 |
| 1.2 G蛋白偶联受体的分类 | 第10-12页 |
| 1.3 GPCR在细胞中主要的信号通路 | 第12-13页 |
| 2 黑素皮质素系统 | 第13-16页 |
| 2.1 黑素皮质素 | 第13-14页 |
| 2.2 黑素皮质素受体 | 第14页 |
| 2.3 通过黑素皮质素系统参与调节机体稳态的物质 | 第14-16页 |
| 3 黑素皮质素受体3的生理作用 | 第16-19页 |
| 3.1 维持能量稳态 | 第17-18页 |
| 3.2 利钠作用 | 第18页 |
| 3.3 免疫作用 | 第18页 |
| 3.4 昼夜节律 | 第18-19页 |
| 4 MC3R突变体的研究 | 第19-20页 |
| 5 本研究的目的意义 | 第20-21页 |
| 第二章 鸡黑素皮质素受体3基因的克隆及其突变体的构建与表达 | 第21-36页 |
| 1 主要材料 | 第21-22页 |
| 1.1 试剂 | 第21-22页 |
| 1.2 设备 | 第22页 |
| 2 试验方法 | 第22-27页 |
| 2.1 序列分析与引物合成 | 第22-23页 |
| 2.2 cMC3R目的基因扩增 | 第23-24页 |
| 2.3 pcDNA3.1(+)-myc/cMC3R-WT真核表达载体的构建 | 第24-25页 |
| 2.4 pcDNA3.1(+)-myc/cMC3R-WT真核表达载体的鉴定 | 第25页 |
| 2.5 pcDNA3.1(+)-myc/cMC3R单点突变体的构建与鉴定 | 第25-26页 |
| 2.6 质粒大提 | 第26页 |
| 2.7 质粒转染HEK293T细胞 | 第26-27页 |
| 2.8 流式细胞仪检测cMC3R野生与突变型的表达 | 第27页 |
| 2.9 数据分析 | 第27页 |
| 3 结果与分析 | 第27-32页 |
| 3.1 cMC3R目的基因的PCR扩增结果 | 第27-28页 |
| 3.2 重组pcDNA3.1(+)-/cMC3R-WT的双酶切和测序结果 | 第28-29页 |
| 3.3 加入Kozak序列和myc分子标签序列的测序鉴定 | 第29-30页 |
| 3.4 cMC3R真核表达载体点突变结果 | 第30页 |
| 3.5 流式细胞仪检测cMC3R野生型与突变型的比较 | 第30-32页 |
| 4 讨论 | 第32-35页 |
| 4.1 鸡MC3R的体外分子克隆 | 第32页 |
| 4.2 真核表达载体的选择 | 第32-33页 |
| 4.3 鸡MC3R突变位点的选择 | 第33-34页 |
| 4.4 质粒转染HEK293T细胞 | 第34-35页 |
| 4.5 流式细胞仪检测蛋白表达水平 | 第35页 |
| 5 小结 | 第35-36页 |
| 第三章 鸡黑素皮质素受体3野生型与突变体的药理学活性的初步研究 | 第36-54页 |
| 1 主要材料 | 第36-37页 |
| 1.1 试剂 | 第36-37页 |
| 1.2 设备 | 第37页 |
| 2 实验方法 | 第37-41页 |
| 2.1 竞争结合法受体配体结合实验 | 第37-39页 |
| 2.2 cMC3R配体对ERK1/2信号通路的影响 | 第39页 |
| 2.3 双报告基因法检测胞内cAMP水平 | 第39-41页 |
| 2.4 数据处理 | 第41页 |
| 3 实验结果 | 第41-50页 |
| 3.1 竞争结合法受体配体结合实验结果 | 第41-42页 |
| 3.2 双报告基因法检测胞内cAMP水平的实验结果 | 第42-48页 |
| 3.3 Western Blot检测胞内MAPK信号通路的实验结果 | 第48-50页 |
| 4 讨论 | 第50-52页 |
| 4.1 放射性配体受体结合实验 | 第50-51页 |
| 4.2 双报告基因法检测胞内cAMP水平 | 第51-52页 |
| 4.3 Western Blot检测胞内ERK1/2信号通路 | 第52页 |
| 5 小结 | 第52-54页 |
| 全文结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-64页 |
| 在读期间发表的文章 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
