| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-21页 |
| 1.1 小麦赤霉病 | 第11-12页 |
| 1.1.1 小麦赤霉病生活史 | 第12页 |
| 1.2 禾谷镰刀菌概况 | 第12-16页 |
| 1.2.1 禾谷镰刀菌分类 | 第12-13页 |
| 1.2.2 禾谷镰刀菌基础生物学特性 | 第13-14页 |
| 1.2.3 禾谷镰刀菌有性生殖 | 第14-16页 |
| 1.2.3.1 禾谷镰刀菌有性阶段的生物学特性 | 第14页 |
| 1.2.3.2 温度、湿度和光照条件对子囊壳和子囊孢子形成的影响 | 第14-15页 |
| 1.2.3.3 子囊孢子的释放与生理和环境因素的关系 | 第15-16页 |
| 1.3 禾谷镰刀菌有性生殖相关基因的研究进展 | 第16-19页 |
| 1.3.1 影响禾谷镰刀菌子囊壳形成的相关基因 | 第16-17页 |
| 1.3.2 影响禾谷镰刀菌子囊孢子形态和释放的相关基因 | 第17-19页 |
| 1.4 PUK2 基因背景介绍 | 第19-20页 |
| 1.5 本研究的目的意义和技术路线 | 第20-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-47页 |
| 2.1 目的基因扩增和重叠的材料与方法 | 第21-28页 |
| 2.1.1 材料 | 第21页 |
| 2.1.2 培养基及主要试剂配方 | 第21-23页 |
| 2.1.3 试验方法 | 第23-28页 |
| 2.1.3.1 禾谷镰刀菌 PUK2 基因序列的下载和引物设计 | 第23-24页 |
| 2.1.3.2 PH-1 菌株的培养与取样 | 第24页 |
| 2.1.3.3 CTAB 法提取 PH-1 基因组 DNA | 第24-25页 |
| 2.1.3.4 质粒 pCB1003 的提取 | 第25页 |
| 2.1.3.5 目的基因片段扩增和重叠（split PCR） | 第25-28页 |
| 2.1.3.6 PCR 产物浓缩 | 第28页 |
| 2.2 PUK2 基因敲除和转化子的鉴定的材料与方法 | 第28-33页 |
| 2.2.1 材料 | 第28页 |
| 2.2.2 培养基及主要试剂配方 | 第28-30页 |
| 2.2.3 实验方法 | 第30-33页 |
| 2.2.3.1 PH-1 菌株原生质体的制备和转化 | 第30-31页 |
| 2.2.3.2 DNA 小量提取方法 | 第31页 |
| 2.2.3.3 Southern blot 验证突变体 | 第31-33页 |
| 2.3 PUK2 基因功能回复和亚细胞定位的实验材料和方法 | 第33-40页 |
| 2.3.1 实验材料 | 第33-34页 |
| 2.3.2 培养基及主要试剂配方 | 第34页 |
| 2.3.3 试验方法 | 第34-40页 |
| 2.3.3.1 基因回复和亚细胞定位定位引物设计 | 第34-37页 |
| 2.3.3.2 基因片段的扩增和 PFL2 质粒的酶切 | 第37页 |
| 2.3.3.3 酵母热激转化 | 第37-38页 |
| 2.3.3.4 酵母菌落 PCR 检测 | 第38页 |
| 2.3.3.5 酵母质粒提取 | 第38页 |
| 2.3.3.6 大肠杆菌 DH10B 菌株感受态细胞的制备 | 第38-39页 |
| 2.3.3.7 酵母质粒电转化和大肠杆菌菌落 PCR 检测 | 第39页 |
| 2.3.3.8 大肠杆菌质粒小量提取方法 | 第39-40页 |
| 2.3.3.9 亚细胞定位载体的原生质转化和转化子的筛选 | 第40页 |
| 2.3.3.10 荧光显微镜观察 PUK2-GFP 亚细胞定位 | 第40页 |
| 2.4 PUK2 突变体表型观察的实验材料和方法 | 第40-44页 |
| 2.4.1 材料 | 第40页 |
| 2.4.2 培养基和主要试剂的配方 | 第40-41页 |
| 2.4.3 试验方法 | 第41-44页 |
| 2.4.3.1 菌落形态观察和生长速率测定 | 第41-42页 |
| 2.4.3.2 分生孢子统计和孢子形态观察 | 第42页 |
| 2.4.3.3 分生孢子的萌发观察 | 第42页 |
| 2.4.3.4 菌落边缘观察 | 第42页 |
| 2.4.3.5 有性生殖实验 | 第42页 |
| 2.4.3.6 子囊孢子的释放试验 | 第42页 |
| 2.4.3.7 子囊孢子的萌发实验 | 第42-43页 |
| 2.4.3.8 压力筛选实验 | 第43页 |
| 2.4.3.9 小麦穗接种实验 | 第43页 |
| 2.4.3.10 玉米秆接种实验 | 第43页 |
| 2.4.3.11 玉米须接种实验 | 第43-44页 |
| 2.5 PUK2 基因不同时期的表达量测定 | 第44-46页 |
| 2.5.1 材料 | 第44页 |
| 2.5.2 主要试剂 | 第44页 |
| 2.5.3 试验方法 | 第44-46页 |
| 2.5.3.1 cDNA 的获得实验方法 | 第44-45页 |
| 2.5.3.2 实时荧光定量 PCR | 第45-46页 |
| 2.6 实验所需仪器 | 第46-47页 |
| 第三章 结果与分析 | 第47-58页 |
| 3.1 PUK2 基因的特性 | 第47-48页 |
| 3.2 PUK2 基因敲除和转化子鉴定结果 | 第48页 |
| 3.3 突变体 PUK2 生物学特性观察和致病性测试结果 | 第48-58页 |
| 3.3.1 突变体的菌落形态和生长速度 | 第48-50页 |
| 3.3.2 突变体的菌落边缘形态 | 第50-51页 |
| 3.3.3 突变体的产孢量、孢子形态及孢子萌发的形态 | 第51页 |
| 3.3.4 突变体的压力筛选 | 第51-52页 |
| 3.3.5 突变体的有性生殖 | 第52-54页 |
| 3.3.6 突变体的致病性 | 第54-55页 |
| 3.3.7 亚细胞定位载体的构建和转化子的获得 | 第55-56页 |
| 3.3.8 PUK2 基因的亚细胞定位 | 第56-57页 |
| 3.3.9 PUK2 基因在禾谷镰刀菌不同时期的表达量 | 第57-58页 |
| 第四章 讨论 | 第58-60页 |
| 第五章 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 作者简介 | 第65页 |
