| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 1 前言 | 第13-28页 |
| 1.1 MADS-box基因的结构和功能分析 | 第13-16页 |
| 1.1.1 MADS-box基因的分类 | 第14页 |
| 1.1.2 MADS-box基因的结构 | 第14-15页 |
| 1.1.3 MADS-box基因的功能 | 第15-16页 |
| 1.2 MADS-box基因对植物开花时间的调控 | 第16-26页 |
| 1.2.1 植物开花的春化途径主要基因 | 第17-20页 |
| 1.2.2 植物开花的光周期途径主要基因 | 第20-22页 |
| 1.2.3 植物开花的自主途径主要基因 | 第22-23页 |
| 1.2.4 植物开花的赤霉素途径主要基因 | 第23-24页 |
| 1.2.5 植物开花的温度响应途径主要基因 | 第24-25页 |
| 1.2.6 植物开花的年龄响应途径主要基因 | 第25-26页 |
| 1.3 本研究的目的及意义 | 第26-28页 |
| 2 材料和方法 | 第28-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-30页 |
| 2.1.1 植物材料和种植 | 第28页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第28页 |
| 2.1.3 酶及生化试剂 | 第28页 |
| 2.1.4 PCR引物 | 第28-30页 |
| 2.1.5 培养基 | 第30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-43页 |
| 2.2.1 RNA提取与反转录 | 第30-32页 |
| 2.2.1.1 Trizol法提取BNA | 第30-31页 |
| 2.2.1.2 DNaseI处理RNA | 第31页 |
| 2.2.1.3 反转录cDNA第一链的合成 | 第31-32页 |
| 2.2.2 质粒DNA的提取和基因组DNA的提取 | 第32-33页 |
| 2.2.2.1 小量碱法提质粒 | 第32页 |
| 2.2.2.2 康为世纪高纯度质粒小提取试剂盒 | 第32-33页 |
| 2.2.2.3 CTAB法植物基因组的提取 | 第33页 |
| 2.2.3 大肠杆菌和农杆菌感受态制备及转化 | 第33-36页 |
| 2.2.3.1 大肠普通杆菌感受态制备 | 第33-34页 |
| 2.2.3.2 大肠杆菌超级感受态制备 | 第34页 |
| 2.2.3.3 热激法转化大肠杆菌感受态 | 第34-35页 |
| 2.2.3.4 农杆菌感受态制备 | 第35页 |
| 2.2.3.5 冻融法转化农杆菌感受态 | 第35-36页 |
| 2.2.4 载体构建 | 第36-38页 |
| 2.2.4.1 PCR扩增目的片段 | 第36页 |
| 2.2.4.2 连接反应 | 第36-37页 |
| 2.2.4.3 切胶与回收 | 第37页 |
| 2.2.4.4 表达载体构建 | 第37-38页 |
| 2.2.5 农杆菌侵染法介导的短柄草遗传转化 | 第38-40页 |
| 2.2.5.1 农杆菌的培养和处理 | 第38页 |
| 2.2.5.2 愈伤组织诱导 | 第38页 |
| 2.2.5.3 侵染与共培养 | 第38-39页 |
| 2.2.5.4 筛选阶段 | 第39页 |
| 2.2.5.5 转基因植株再生 | 第39页 |
| 2.2.5.6 转基因植株的鉴定 | 第39页 |
| 2.2.5.7 转基因植物GUS组织化学染色分析 | 第39-40页 |
| 2.2.6 短柄草取材 | 第40-41页 |
| 2.2.6.1 春化实验取材 | 第40页 |
| 2.2.6.2 昼夜节律性取材 | 第40-41页 |
| 2.2.6.3 光周期实验取材 | 第41页 |
| 2.2.6.4 不同部位表达差异取材 | 第41页 |
| 2.2.6.5 不同温度条件下表达差异取材 | 第41页 |
| 2.2.7 实时定量PCR | 第41-43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-59页 |
| 3.1 BdVRT2基因的克隆及结构分析 | 第43-45页 |
| 3.1.1 BdVRT2基因的克隆 | 第43-44页 |
| 3.1.2 氨基酸序列分析 | 第44-45页 |
| 3.2 BdVRT2基因的表达分析 | 第45-49页 |
| 3.2.1 BdVRT2在长短日照下昼夜节律性的表达分析 | 第45页 |
| 3.2.2 BdVRT2在不同光周期条件下的表达分析 | 第45-47页 |
| 3.2.3 BdVRT2在春化条件下的表达分析 | 第47页 |
| 3.2.4 BdVRT2在不同温度条件下的表达分析 | 第47-49页 |
| 3.2.5 BdVRT2的表达部位分析 | 第49页 |
| 3.3 BdVRT2基因在短柄草中的功能分析 | 第49-59页 |
| 3.3.1 相关表达载体的构建 | 第50页 |
| 3.3.2 短柄草中过表达BdVRT2的表型分析 | 第50-53页 |
| 3.3.3 转基因植株开花时间分析 | 第53-54页 |
| 3.3.4 晚花植株花器官的形态学分析 | 第54-55页 |
| 3.3.5 转基因植株中穗发育的多效性分析 | 第55-56页 |
| 3.3.6 转基因植株中相关开花基因表达量分析 | 第56-57页 |
| 3.3.7 春化不能逆转转基因植株的晚花表型 | 第57-59页 |
| 4 讨论 | 第59-62页 |
| 4.1 二穗短柄草作为禾本科模式植物的依据 | 第59页 |
| 4.2 BdVRT2基因的表达模式分析 | 第59-60页 |
| 4.3 BdVRT2基因的功能分析 | 第60页 |
| 4.4 BdVRT2基因调控的开花通路分析 | 第60-62页 |
| 5 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第73页 |
