| 中文摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8页 |
| 1 前言 | 第9-24页 |
| 1.1 花粉管的极性生长 | 第9-20页 |
| 1.1.1 花粉管内细胞骨架蛋白 | 第10-11页 |
| 1.1.2 花粉管内细胞活动：胞外分泌和细胞内吞 | 第11-14页 |
| 1.1.3 花粉管内调控体系 | 第14-19页 |
| 1.1.4 花粉管内信号传递与其细胞结构的协调 | 第19-20页 |
| 1.1.5 花粉管顶端导向性和极性生长的外界信号 | 第20页 |
| 1.2 类受体激酶 | 第20-21页 |
| 1.3 RopGEFs | 第21-22页 |
| 1.4 本实验的目的意义 | 第22-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-25页 |
| 2.1.1 植物材料与生长条件 | 第24页 |
| 2.1.2 菌株与质粒 | 第24页 |
| 2.1.3 酶及生化试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.4 引物 | 第25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-40页 |
| 2.2.1 RT-PCR | 第25-27页 |
| 2.2.1.1 植物RNA的提取 | 第25-26页 |
| 2.2.1.2 反转录 | 第26-27页 |
| 2.2.2 表达载体构建 | 第27-30页 |
| 2.2.2.1 Phusion Clone | 第27页 |
| 2.2.2.2 PCR产物回收 | 第27-28页 |
| 2.2.2.3 TOPO连接 | 第28页 |
| 2.2.2.4 大肠杆菌转化及质粒小提 | 第28-29页 |
| 2.2.2.5 测序 | 第29页 |
| 2.2.2.6 LR反应 | 第29-30页 |
| 2.2.2.7 质粒DNA酶切鉴定 | 第30页 |
| 2.2.3 农杆菌介导的拟南芥遗传转化 | 第30-32页 |
| 2.2.3.1 冻融法转化农杆菌感受态细胞 | 第30页 |
| 2.2.3.2 农杆菌介导的拟南芥转化 | 第30-31页 |
| 2.2.3.3 转基因拟南芥植株的鉴定 | 第31页 |
| 2.2.3.4 植物基因组DNA提取 | 第31-32页 |
| 2.2.4 拟南芥花粉萌发及基因枪法转化烟草花粉 | 第32-34页 |
| 2.2.4.1 拟南芥体外花粉萌发 | 第32页 |
| 2.2.4.2 基因枪法转化烟草花粉 | 第32-34页 |
| 2.2.5 药剂处理及荧光染料染色 | 第34-35页 |
| 2.2.5.1 FM4-64染色 | 第35页 |
| 2.2.5.2 BFA处理 | 第35页 |
| 2.2.5.3 LatB及oryzalin处理 | 第35页 |
| 2.2.6 激光共聚焦扫描隧道显微镜观察及图像处理 | 第35页 |
| 2.2.7 膜蛋白酵母双杂交及量化 | 第35-40页 |
| 2.2.7.1 膜蛋白酵母双杂交 | 第35-38页 |
| 2.2.7.2 β-半乳糖苷酶的定量分析 | 第38-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-53页 |
| 3.1 花粉特异的AtPRK2突变体的鉴定及表型分析 | 第40-41页 |
| 3.2 AtPRK2过表达引起的花粉管极性丧失不依赖于其酶活 | 第41-43页 |
| 3.3 AtPRK2的过表达造成活性小G蛋白和微丝的定位异常 | 第43-45页 |
| 3.4 AtPRK2过表达对微丝动态聚合的影响 | 第45-47页 |
| 3.5 AtPRK2的非催化功能域对其过表达的表型起关键作用 | 第47-50页 |
| 3.6 AtPRK2诱导的花粉管去极化依赖于和RopGEF12的互作 | 第50-53页 |
| 4 讨论 | 第53-56页 |
| 5 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第68页 |
