| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 引言 | 第11-22页 |
| 1.1 IBV的病原学概述 | 第12-14页 |
| 1.1.1 IBV的分类地位 | 第12页 |
| 1.1.2 IBV的结构特征 | 第12-13页 |
| 1.1.3 IBV的理化特征 | 第13页 |
| 1.1.4 IBV的血凝特性 | 第13页 |
| 1.1.5 IBV的培养特性 | 第13-14页 |
| 1.2 IBV的流行病学概述 | 第14页 |
| 1.3 IBV的结构蛋白及生物学功能 | 第14-16页 |
| 1.3.1 纤突蛋白 | 第14-15页 |
| 1.3.2 核衣壳蛋白 | 第15页 |
| 1.3.3 膜蛋白 | 第15-16页 |
| 1.3.4 小囊膜蛋白 | 第16页 |
| 1.4 IBV的非结构蛋白及生物学功能 | 第16-17页 |
| 1.5 IB检测诊断方法的研究进展 | 第17-21页 |
| 1.5.1 IBV的分离与鉴定 | 第17-18页 |
| 1.5.2 血清学诊断 | 第18-20页 |
| 1.5.3 分子生物学诊断 | 第20-21页 |
| 1.6 单克隆抗体在IB诊断中的应用 | 第21页 |
| 1.7 研究意义 | 第21-22页 |
| 2 N蛋白的原核表达 | 第22-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-25页 |
| 2.1.1 实验仪器及设备 | 第22页 |
| 2.1.2 实验耗材及试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.3 病毒株及实验动物 | 第23页 |
| 2.1.4 载体和菌株 | 第23页 |
| 2.1.5 主要溶液的配制 | 第23-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-34页 |
| 2.2.1 IBV的增殖 | 第25-26页 |
| 2.2.2 构建克隆载体pMD19-T-N | 第26-29页 |
| 2.2.3 构建原核表达载体pGEX-6P-1-N | 第29-31页 |
| 2.2.4 重组N蛋白的原核表达 | 第31-32页 |
| 2.2.5 重组N蛋白的可溶性分析 | 第32页 |
| 2.2.6 重组N蛋白表达条件的优化 | 第32页 |
| 2.2.7 重组N蛋白的纯化 | 第32-33页 |
| 2.2.8 重组N蛋白GST标签的切除 | 第33页 |
| 2.2.9 N蛋白的抗原性鉴定 | 第33-34页 |
| 2.2.10 N蛋白浓度的测定 | 第34页 |
| 2.3 结果 | 第34-39页 |
| 2.3.1 N基因的扩增 | 第34-35页 |
| 2.3.2 重组载体的鉴定 | 第35-36页 |
| 2.3.3 重组N蛋白的原核表达及鉴定 | 第36页 |
| 2.3.4 重组N蛋白表达条件的优化 | 第36-38页 |
| 2.3.5 重组N蛋白的纯化 | 第38页 |
| 2.3.6 N蛋白的抗原性鉴定 | 第38-39页 |
| 2.3.7 N蛋白的浓度测定 | 第39页 |
| 2.4 讨论 | 第39-40页 |
| 2.4.1 PCR程序的选择 | 第39页 |
| 2.4.2 表达菌株的选择 | 第39-40页 |
| 2.4.3 N蛋白的表达 | 第40页 |
| 2.5 小结 | 第40-41页 |
| 3 IBVN蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 | 第41-55页 |
| 3.1 实验材料 | 第41-43页 |
| 3.1.1 实验仪器及设备 | 第41-42页 |
| 3.1.2 实验耗材及试剂 | 第42页 |
| 3.1.3 实验溶液 | 第42-43页 |
| 3.1.4 实验动物及细胞 | 第43页 |
| 3.2 实验方法 | 第43-48页 |
| 3.2.1 动物免疫 | 第43-44页 |
| 3.2.2 SP2/0细胞的制备 | 第44页 |
| 3.2.3 饲养细胞的制备 | 第44-45页 |
| 3.2.4 脾细胞的制备 | 第45页 |
| 3.2.5 细胞融合 | 第45页 |
| 3.2.6 杂交瘤细胞阳性孔筛选 | 第45-46页 |
| 3.2.7 杂交瘤细胞的亚克隆 | 第46页 |
| 3.2.8 单克隆抗体的大量制备 | 第46页 |
| 3.2.9 单克隆抗体的纯化 | 第46-47页 |
| 3.2.10 单克隆抗体的鉴定 | 第47-48页 |
| 3.3 结果 | 第48-53页 |
| 3.3.1 杂交瘤细胞株的建立 | 第48-49页 |
| 3.3.2 单克隆抗体浓度与纯度的测定 | 第49-50页 |
| 3.3.3 单克隆抗体效价的测定 | 第50页 |
| 3.3.4 单克隆抗体与不同IBV毒株的反应性 | 第50-51页 |
| 3.3.5 单克隆抗体亚型鉴定 | 第51页 |
| 3.3.6 单克隆抗体亲和力的测定 | 第51-52页 |
| 3.3.7 单克隆抗体特异性鉴定 | 第52-53页 |
| 3.3.8 杂交瘤细胞株稳定性鉴定 | 第53页 |
| 3.4 讨论 | 第53-54页 |
| 3.4.1 细胞融合 | 第53页 |
| 3.4.2 阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第53页 |
| 3.4.3 杂交瘤细胞的亚克隆 | 第53-54页 |
| 3.4.4 IBVN蛋白单克隆抗体 | 第54页 |
| 3.5 小结 | 第54-55页 |
| 4 实验结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-64页 |
| 附录 英文缩写词汇表 | 第64-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第67页 |