| 摘要 | 第6-8页 |
| abstract | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-20页 |
| 1.1 奶牛的乳腺发育机制 | 第12页 |
| 1.2 乳腺上皮细胞的发育过程 | 第12-13页 |
| 1.3 乳腺发育相关调控通路 | 第13-14页 |
| 1.3.1 JAK2-STAT5信号通路 | 第13页 |
| 1.3.2 PI3K-AKT/mTOR信号通路 | 第13-14页 |
| 1.4 MICRORNA的研究进展 | 第14-18页 |
| 1.4.1 microRNA的发现与分子机理 | 第14-15页 |
| 1.4.2 乳腺发育和泌乳相关的miRNA的研究进展 | 第15-17页 |
| 1.4.3 miR-221的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.5 研究内容和技术路线 | 第18-19页 |
| 1.5.1 研究内容 | 第18-19页 |
| 1.5.2 技术路线 | 第19页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第19-20页 |
| 第二章 miR-221在奶牛乳腺上皮细胞中的功能探究 | 第20-34页 |
| 2.1 材料与方法 | 第20-26页 |
| 2.1.1 试验菌株、质粒和细胞系 | 第20页 |
| 2.1.2 试验试剂及配制 | 第20页 |
| 2.1.3 试验仪器 | 第20页 |
| 2.1.4 引物 | 第20-21页 |
| 2.1.5 奶牛乳腺上皮细胞的培养 | 第21页 |
| 2.1.6 转染miR-221mimic与inhibitor的最适添加量 | 第21-22页 |
| 2.1.7 实时荧光定量PCR(qRT-PCR) | 第22-24页 |
| 2.1.8 细胞活力检测：MTT试验 | 第24-25页 |
| 2.1.9 细胞周期检测：细胞流式试验 | 第25-26页 |
| 2.1.10 数据处理 | 第26页 |
| 2.2 结果与分析 | 第26-31页 |
| 2.2.1 奶牛乳腺上皮细胞的培养 | 第26页 |
| 2.2.2 转染时RNA与脂质体2000的最适添加量及转染效率 | 第26-28页 |
| 2.2.3 qRT-PCR检测牛乳腺上皮细胞中miR-22的过表达和抑制表达效果 | 第28-30页 |
| 2.2.4 转染miR-221mimic与inhibitor后细胞活力检测 | 第30页 |
| 2.2.5 转染miR-221mimic与inhibitor后细胞周期检测 | 第30-31页 |
| 2.3 讨论 | 第31-33页 |
| 2.4 小结 | 第33-34页 |
| 第三章 miR-221对JAK2-STAT5和PI3K-Akt/mTOR信号通路基因的调控机制研究.. | 第34-50页 |
| 3.1 材料与方法 | 第34-43页 |
| 3.1.1 细胞系 | 第34页 |
| 3.1.2 主要试剂及试剂配制 | 第34页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第34页 |
| 3.1.4 引物 | 第34页 |
| 3.1.5 双荧光报告分析miR-221的靶标 | 第34-39页 |
| 3.1.6 miR-221靶向IRS1、STAT5a的qRT-PCR验证及WesternBlot验证 | 第39-42页 |
| 3.1.7 miR-221对信号通路下游基因的调控作用初探 | 第42页 |
| 3.1.8 数据处理 | 第42-43页 |
| 3.2 结果与分析 | 第43-47页 |
| 3.2.1 mRNA3’UTR荧光素酶报告系统的构建及鉴定 | 第43页 |
| 3.2.2 HEK293T细胞培养状态以及细胞的转染效率 | 第43-44页 |
| 3.2.3 miR-221的过表达与抑制表达对双荧光报告基因3’UTR作用的检测结果 | 第44-45页 |
| 3.2.4 qRT-PCR验证过表达与抑制表达miR-221对预测靶基因mRNA表达的影响 | 第45-46页 |
| 3.2.5 过表达与抑制表达miR-221后对IRS1和STAT5a蛋白表达的影响 | 第46页 |
| 3.2.6 过表达与抑制表达miR-221对基因SOCS3,mTOR,AKT3和PIK3R1mRNA表达的影响 | 第46-47页 |
| 3.3 讨论 | 第47-49页 |
| 3.4 小结 | 第49-50页 |
| 第四章 结论与创新点 | 第50-51页 |
| 4.1 结论 | 第50页 |
| 4.2 主要创新点 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-58页 |
| 附录 | 第58-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 作者简介 | 第62页 |
