| 中文摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 主要缩略词表 | 第11-13页 |
| 绪论 | 第13-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-45页 |
| 1.1 突触简介 | 第15-16页 |
| 1.2 果蝇NMJ是研究突触的理想模型 | 第16-17页 |
| 1.3 果蝇幼虫NMJ的形态结构 | 第17-19页 |
| 1.4 果蝇幼虫NMJ的形成和发育 | 第19-20页 |
| 1.5 果蝇NMJ形态发育和可塑性的调控 | 第20-37页 |
| 1.5.1 细胞骨架 | 第21-26页 |
| 1.5.2 Wnt信号通路 | 第26-28页 |
| 1.5.3 BMP信号通路 | 第28-35页 |
| 1.5.4 神经元兴奋性 | 第35-36页 |
| 1.5.5 突触粘附分子 | 第36-37页 |
| 1.6 Nlg对突触形成和突触发育的研究进展 | 第37-45页 |
| 1.6.1 Nlg与自闭症 | 第37-38页 |
| 1.6.2 Nlg的分子结构 | 第38-39页 |
| 1.6.3 Nlg的神经分布和突触定位 | 第39-40页 |
| 1.6.4 Nlg对突触调控的体外研究 | 第40-41页 |
| 1.6.5 Nlg对突触调控的在体研究 | 第41-42页 |
| 1.6.6 Nlg突触发育功能在果蝇的研究 | 第42-45页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第45-57页 |
| 2.1 果蝇品系 | 第45页 |
| 2.2 转基因果蝇的制备 | 第45-46页 |
| 2.2.1 UAS-dnlg4转基因果蝇的制备 | 第45-46页 |
| 2.2.2 UAS-dnlg4-GFP转基因果蝇的制备 | 第46页 |
| 2.3 dnlg4突变体果蝇的制备 | 第46-48页 |
| 2.3.1 原理 | 第46-47页 |
| 2.3.2 dnlg4缺失突变体果蝇的制备 | 第47-48页 |
| 2.4 DNlg4多克隆抗体的制备 | 第48-50页 |
| 2.4.1 重组质粒的构建 | 第48页 |
| 2.4.2 融合蛋白的表达与纯化 | 第48页 |
| 2.4.3 多抗制备动物的免疫 | 第48-49页 |
| 2.4.4 多抗抗血清的收集 | 第49页 |
| 2.4.5 多抗的亲和层析纯化 | 第49-50页 |
| 2.5 单克隆抗体的制备 | 第50页 |
| 2.6 免疫印迹 | 第50页 |
| 2.7 免疫染色 | 第50-51页 |
| 2.7.1 样品的制备 | 第50-51页 |
| 2.7.2 样品的荧光免疫染色 | 第51页 |
| 2.7.3 荧光信号强度分析 | 第51页 |
| 2.8 胚胎RNA原位杂交 | 第51-53页 |
| 2.8.1 dnlg4 RNA探针的合成与标记 | 第51-52页 |
| 2.8.2 果蝇胎胚收集与处理 | 第52页 |
| 2.8.3 胎胚的RNA杂交 | 第52-53页 |
| 2.9 果蝇三龄幼虫NMJ电镜检测 | 第53页 |
| 2.9.1 样品处理 | 第53页 |
| 2.9.2 样品包埋 | 第53页 |
| 2.9.3 切片并观察 | 第53页 |
| 2.9.4 图像采集与统计分析 | 第53页 |
| 2.10 三龄幼虫NMJ电生理分析 | 第53-54页 |
| 2.10.1 三龄幼虫的解剖 | 第53-54页 |
| 2.10.2 NMJ电信号的胞内记录 | 第54页 |
| 2.10.3 数据分析 | 第54页 |
| 2.11 RT-PCR及mRNA的定量分析 | 第54-55页 |
| 2.11.1 果蝇幼虫组织总RNA的提取 | 第54页 |
| 2.11.2 反转录合成cDNA | 第54页 |
| 2.11.3 目的基因cDNA的PCR扩增 | 第54-55页 |
| 2.12 免疫共沉淀 | 第55页 |
| 2.12.1 组织样品收集处理 | 第55页 |
| 2.12.2 用相应抗体进行免疫共沉淀 | 第55页 |
| 2.13 Pull down实验 | 第55-56页 |
| 2.13.1 制备DNlg4-N-His和DNlg4-C-GST融合蛋白 | 第55页 |
| 2.13.2 对目的蛋白进行pull down | 第55-56页 |
| 2.14 三龄幼虫运动活性检测 | 第56页 |
| 2.15 三龄幼虫NMJ形态定量分析 | 第56页 |
| 2.16 统计方法 | 第56-57页 |
| 第三章 实验结果 | 第57-85页 |
| 引言 | 第57页 |
| 3.1 DNlg4在果蝇胚胎及幼虫神经系统的定位 | 第57-62页 |
| 3.1.1 DNlg4的分子结构及与哺乳动物Nlg同源性分析 | 第57-58页 |
| 3.1.2 DNlg4在胚胎神经系统高表达 | 第58页 |
| 3.1.3 DNlg4集中于幼虫中枢神经系统突触密集区 | 第58-59页 |
| 3.1.4 DNlg4主要分布于NMJ的突触前 | 第59-62页 |
| 3.2 突触前DNlg4调控NMJ突触的生长发育 | 第62-70页 |
| 3.2.1 dnlg4缺失突变体果蝇的制备和鉴定 | 第62-63页 |
| 3.2.2 DNlg4缺失导致NMJ突触发育缺陷 | 第63-65页 |
| 3.2.3 DNlg4缺失导致NMJ突触结构异常 | 第65-66页 |
| 3.2.4 dnlg4突变体未见有显著的突触分化缺陷 | 第66-67页 |
| 3.2.5 突触前DNlg4挽救dnlg4突变体的发育缺陷 | 第67-68页 |
| 3.2.6 突触前敲低DNlg4抑制NMJ突触发育 | 第68-69页 |
| 3.2.7 突触前过表达DNlg4促进NMJ突触发育 | 第69-70页 |
| 3.3 DNlg4通过调控BMP信号调控突触发育 | 第70-81页 |
| 3.3.1 DNlg4与BMP成员对NMJ发育调控具有遗传学相互作用 | 第70-71页 |
| 3.3.2 过表达DNlg4导致的突触生长依赖于BMP信号 | 第71-72页 |
| 3.3.3 BMP信号抑制因子Dad缺失导致的突触生长依赖于DNlg4 | 第72-73页 |
| 3.3.4 DNlg4正向调控突触前BMP信号水平 | 第73-74页 |
| 3.3.5 DNlg4特异性调控果蝇幼虫头部Tkv蛋白水平 | 第74-76页 |
| 3.3.6 DNlg4调控NMJ突触前Tkv的稳定 | 第76页 |
| 3.3.7 DNlg4通过其N端结构域与Tkv相互作用 | 第76-78页 |
| 3.3.8 DNlg4拮抗S6KL调控突触生长 | 第78-79页 |
| 3.3.9 DNlg4缺失导致NMJ突触功能障碍 | 第79-80页 |
| 3.3.10 DNlg4缺失突变体运动活性降低 | 第80-81页 |
| 3.4 DNlg4对突触发育的调控不依赖DNrx | 第81-85页 |
| 3.4.1 DNlg4与DNrx互不影响彼此在幼虫中枢神经系统的表达与分布 | 第81-82页 |
| 3.4.2 DNlg4对突触发育的调控不依赖于DNrx | 第82-85页 |
| 第四章 讨论 | 第85-95页 |
| 4.1 DNlg4的突触功能及其与果蝇其它Nlg的区别 | 第85-87页 |
| 4.2 DNlg4以突触前作用调控突触的发育和功能 | 第87-88页 |
| 4.3 DNlg4调控突触前BMP信号进而影响突触发育 | 第88-89页 |
| 4.4 DNlg4募集并稳定突触前Tkv | 第89-90页 |
| 4.5 DNlg4通过拮抗S6KL调控Tkv | 第90页 |
| 4.6 DNlg4和DNrx在调控NMJ发育中有着相关但不相同的分子机制 | 第90-92页 |
| 4.7 展望 | 第92-95页 |
| 参考文献 | 第95-111页 |
| 致谢 | 第111-113页 |
| 作者简介 | 第113页 |
