| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-23页 |
| 1.1 HEV的研究进展 | 第11-22页 |
| 1.1.1 HEV的分子生物学 | 第11-17页 |
| 1.1.2 HEV的流行病学 | 第17-18页 |
| 1.1.3 HEV的诊断 | 第18-21页 |
| 1.1.4 戊型肝炎的预防与控制 | 第21-22页 |
| 1.2 本研究的目的与意义 | 第22-23页 |
| 第二章 猪HEV ORF2重组蛋白sHEV-ORF2-C的原核表达及纯化 | 第23-31页 |
| 2.1 材料 | 第23页 |
| 2.1.1 载体与菌株 | 第23页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第23页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-28页 |
| 2.2.1 PCR扩增目的片段 | 第23-24页 |
| 2.2.2 PCR产物回收 | 第24-25页 |
| 2.2.3 PCR产物酶切及连接 | 第25页 |
| 2.2.4 连接产物转化 | 第25页 |
| 2.2.5 阳性菌落筛选 | 第25-26页 |
| 2.2.6 重组质粒转化 | 第26页 |
| 2.2.7 诱导表达及可溶性分析 | 第26页 |
| 2.2.8 表达蛋白复性 | 第26-27页 |
| 2.2.9 表达蛋白纯化 | 第27页 |
| 2.2.10 表达蛋白westernblot分析 | 第27-28页 |
| 2.3 重组质粒的构建及鉴定结果 | 第28-29页 |
| 2.3.1 扩增目的片段的结果 | 第28页 |
| 2.3.2 表达产物的SDS-PAGE和Westernblot分析 | 第28-29页 |
| 2.4 讨论 | 第29-31页 |
| 第三章 基于猪HEV ORF2截短蛋白间接ELISA方法的建立及初步应用 | 第31-43页 |
| 3.1 材料 | 第31-32页 |
| 3.1.1 蛋白和临床血清 | 第31页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第31-32页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第32页 |
| 3.2 方法 | 第32-35页 |
| 3.2.1 ELISA检测操作流程 | 第32页 |
| 3.2.2 确定抗原最佳包被浓度和血清最佳稀释度 | 第32-33页 |
| 3.2.3 确定抗原最佳包被时间 | 第33页 |
| 3.2.4 确定最佳包被缓冲液和封闭液 | 第33页 |
| 3.2.5 确定封闭最佳时间 | 第33页 |
| 3.2.6 确定待检血清最佳反应时间 | 第33页 |
| 3.2.7 确定酶标二抗最佳稀释度及反应时间 | 第33-34页 |
| 3.2.8 确定底物最佳显色时间 | 第34页 |
| 3.2.9 确定临界值 | 第34页 |
| 3.2.10 特异性试验 | 第34页 |
| 3.2.11 敏感性试验 | 第34页 |
| 3.2.12 重复性试验 | 第34-35页 |
| 3.2.13 准确性试验 | 第35页 |
| 3.2.14 临床检测 | 第35页 |
| 3.3 结果 | 第35-42页 |
| 3.3.1 抗原最佳包被浓度和血清最佳稀释度的确定 | 第35-36页 |
| 3.3.2 抗原最佳包被时间的确定 | 第36页 |
| 3.3.3 最佳包被缓冲液和封闭液的确定 | 第36页 |
| 3.3.4 封闭最佳时间的确定 | 第36-37页 |
| 3.3.5 一抗血清最佳反应时间的确定 | 第37页 |
| 3.3.6 酶标二抗最佳稀释度及反应时间的确定 | 第37-38页 |
| 3.3.7 底物最佳显色时间的确定 | 第38页 |
| 3.3.8 临界值的确定 | 第38-39页 |
| 3.3.9 特异性试验 | 第39页 |
| 3.3.10 敏感性试验 | 第39-40页 |
| 3.3.11 重复性试验 | 第40页 |
| 3.3.12 准确性试验 | 第40-41页 |
| 3.3.13 临床样品检测 | 第41-42页 |
| 3.4 讨论 | 第42-43页 |
| 结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 作者简介 | 第53页 |
