| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 引言 | 第14-24页 |
| 1.1 磷脂酶D | 第15-19页 |
| 1.1.1 PLD的生物学功能 | 第15-16页 |
| 1.1.2 PLD在肿瘤中发生、发展中的作用 | 第16-18页 |
| 1.1.3 PLD的调控机制 | 第18-19页 |
| 1.2 PLD参与的信号通路 | 第19-23页 |
| 1.2.1 PLD与mTOR信号通路 | 第19-21页 |
| 1.2.2 PLD与Wnt信号通路 | 第21-23页 |
| 1.3 本课题研究的目标、内容与意义 | 第23-24页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第24-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-30页 |
| 2.1.1 细胞系、质粒和裸鼠 | 第24页 |
| 2.1.2 工具酶和抗体 | 第24-25页 |
| 2.1.3 主要化学试剂和耗材 | 第25-26页 |
| 2.1.4 细胞培养试剂 | 第26页 |
| 2.1.5 主要仪器 | 第26-27页 |
| 2.1.6 主要溶液配制 | 第27-30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-43页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第30-32页 |
| 2.2.2 细胞增殖存活率测定(MTT法) | 第32页 |
| 2.2.3 PLD稳定转染KM12SM细胞株的建立 | 第32-34页 |
| 2.2.4 总蛋白浓度测定(BCA法测定蛋白浓度) | 第34-35页 |
| 2.2.5 免疫共沉淀与Western Blot检测蛋白表达 | 第35-38页 |
| 2.2.6 质粒的中量提取 | 第38页 |
| 2.2.7 脂质体转染(Lipofect AMINE 2000 reagent) | 第38页 |
| 2.2.8 实时定量RT-PCR法 | 第38-39页 |
| 2.2.9 免疫组化染色 | 第39-40页 |
| 2.2.10 Transwell细胞迁移和侵袭实验 | 第40页 |
| 2.2.11 荧光素酶报告基因检测 | 第40-42页 |
| 2.2.12 裸鼠移植瘤实验 | 第42页 |
| 2.2.13 数据处理 | 第42-43页 |
| 第3章 实验结果 | 第43-58页 |
| 第一部分 体外实验 | 第43-53页 |
| 3.1 PLD调节结肠癌细胞生物学功能 | 第43-47页 |
| 3.1.1 PLD对人结肠癌细胞增殖存活率的影响 | 第43-44页 |
| 3.1.2 PLD对人结肠癌细胞迁移的影响 | 第44-45页 |
| 3.1.3 磷脂酶D促进人结肠癌细胞增殖和迁移的分子机制 | 第45-47页 |
| 3.2 在人结肠癌细胞KM12SM中构建PLD稳定转染细胞株 | 第47-49页 |
| 3.2.1 KM12SM细胞株的G418筛药最佳浓度的确定 | 第47-48页 |
| 3.2.3 PLD的人结肠癌细胞稳转细胞株的鉴定 | 第48-49页 |
| 3.3 PLD稳定转染细胞株的生物学功能 | 第49-53页 |
| 3.3.1 PLD的稳定转染细胞株的增殖存活率的变化 | 第49-50页 |
| 3.3.2 PLD的稳定转染细胞株的迁移和侵袭能力的变化 | 第50-51页 |
| 3.3.3 PLD的稳定转染细胞株的Wnt信号通路活性变化情况 | 第51-53页 |
| 第二部分 体内实验结果 | 第53-58页 |
| 3.4 PLD可促进裸鼠肿瘤增长 | 第53-56页 |
| 3.5 PLD可升高裸鼠移植瘤组织内多种蛋白表达 | 第56-58页 |
| 第4章 讨论 | 第58-68页 |
| 4.1 PLD对人结肠癌细胞的存活具有明显的促进作用 | 第59-60页 |
| 4.2 PLD能够提高人结肠癌细胞的Wnt信号通路活性 | 第60-62页 |
| 4.3 构建KM12SM细胞的PLD稳定转染细胞株 | 第62-67页 |
| 4.3.1 高表达PLD的稳定转染细胞株的建立 | 第63-64页 |
| 4.3.2 高表达PLD的稳定转染细胞株的生物学功能检测 | 第64-66页 |
| 4.3.3 高表达PLD的稳定转染细胞株的Wnt通路活性检测 | 第66-67页 |
| 4.4 PLD有效促进裸鼠移植瘤的生长和多种蛋白表达 | 第67-68页 |
| 第5章 结论 | 第68-69页 |
| 5.1 体外细胞学实验 | 第68页 |
| 5.2 体内(裸鼠)实验 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
