| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 第1章 绪论 | 第9-19页 |
| 1.1 小菜蛾抗性发展现状 | 第9-10页 |
| 1.2 小菜蛾对农药抗性的研究 | 第10-13页 |
| 1.2.1 有机磷类 | 第10-11页 |
| 1.2.2 拟除虫菊酯类 | 第11页 |
| 1.2.3 氨基甲酸酯类 | 第11-12页 |
| 1.2.4 沙蚕毒素类 | 第12页 |
| 1.2.5 抗生素阿维菌素类 | 第12页 |
| 1.2.6 苏云金杆菌类 | 第12-13页 |
| 1.3 小菜蛾的抗药性机制 | 第13-14页 |
| 1.3.1 解毒酶活性增加 | 第13-14页 |
| 1.3.2 靶标敏感度降低 | 第14页 |
| 1.4 蛋白质组学研究 | 第14-17页 |
| 1.4.1 蛋白质组学研究策略 | 第14-15页 |
| 1.4.2 蛋白质组学技术 | 第15-16页 |
| 1.4.2.1 蛋白质分离技术 | 第15-16页 |
| 1.4.2.2 蛋白质鉴定技术 | 第16页 |
| 1.4.3 蛋白质组学在昆虫抗药性方面的研究 | 第16-17页 |
| 1.5 基因转染技术 | 第17-19页 |
| 第2章 小菜蛾幼虫体内差异表达蛋白的分离与鉴定 | 第19-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第19页 |
| 2.1.1 供试小菜蛾 | 第19页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第19页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-27页 |
| 2.2.1 试剂配制 | 第19-22页 |
| 2.2.2 蛋白样品制备 | 第22-23页 |
| 2.2.2.1 小菜蛾幼虫总蛋白的提取 | 第22页 |
| 2.2.2.2 蛋白标准曲线的制备和浓度检测 | 第22-23页 |
| 2.2.3 双向电泳 | 第23-25页 |
| 2.2.3.1 第一向等电聚焦(IEF) | 第23-24页 |
| 2.2.3.2 第二向SDS-PAGE电泳 | 第24-25页 |
| 2.2.4 图像采集与分析 | 第25-26页 |
| 2.2.4.1 银染 | 第25-26页 |
| 2.2.4.2 凝胶扫描与图像分析 | 第26页 |
| 2.2.5 质谱鉴定 | 第26-27页 |
| 2.2.5.1 取点 | 第26页 |
| 2.2.5.2 胶内酶解 | 第26页 |
| 2.2.5.3 MALDI-TOF-TOF 质谱 | 第26-27页 |
| 2.3 实验结果 | 第27-31页 |
| 2.3.1 蛋白质样品的浓度测定 | 第27-28页 |
| 2.3.2 小菜蛾幼虫的双向电泳图谱 | 第28-29页 |
| 2.3.3 差异蛋白点的质谱鉴定结果 | 第29-31页 |
| 2.4 讨论 | 第31-35页 |
| 2.4.1 双向电泳图谱分析 | 第31页 |
| 2.4.2 质谱鉴定结果分析 | 第31-35页 |
| 第3章 应用qRT-PCR技术验证小菜蛾幼虫体内差异蛋白质的表达 | 第35-43页 |
| 3.1 实验材料 | 第35页 |
| 3.1.1 供试小菜蛾 | 第35页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第35页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第35页 |
| 3.2 实验方法 | 第35-38页 |
| 3.2.1 提取小菜蛾幼虫总RNA | 第35-36页 |
| 3.2.2 检测RNA的浓度和纯度 | 第36页 |
| 3.2.3 合成cDNA | 第36-37页 |
| 3.2.4 实时荧光定量PCR | 第37页 |
| 3.2.5 数据统计与分析 | 第37-38页 |
| 3.3 结果 | 第38-41页 |
| 3.3.1 RNA样品的测定 | 第38页 |
| 3.3.2 qRT-PCR检测结果 | 第38页 |
| 3.3.3 差异点蛋白的表达分析 | 第38-41页 |
| 3.4 讨论 | 第41-43页 |
| 第4章 TCTP过表达对Kc细胞溴氰菊酯敏感性的影响 | 第43-54页 |
| 4.1 实验材料 | 第43页 |
| 4.1.1 供试小菜蛾 | 第43页 |
| 4.1.2 果蝇Kc细胞 | 第43页 |
| 4.1.3 主要试剂和仪器 | 第43页 |
| 4.1.4 主要仪器 | 第43页 |
| 4.2 实验方法 | 第43-50页 |
| 4.2.1 TCTP目的基因的制备 | 第43-44页 |
| 4.2.1.1 提取小菜蛾幼虫总RNA | 第43-44页 |
| 4.2.1.2 合成cDNA | 第44页 |
| 4.2.1.3 PCR扩增目的基因片段 | 第44页 |
| 4.2.2 构建重组质粒 | 第44-47页 |
| 4.2.2.1 PCR产物纯化 | 第45页 |
| 4.2.2.2 构建pIB-TCTP重组质粒 | 第45-46页 |
| 4.2.2.3 鉴定重组质粒 | 第46-47页 |
| 4.2.3 瞬时转染Kc细胞 | 第47-48页 |
| 4.2.3.1 抽提质粒 | 第47-48页 |
| 4.2.3.2 Kc细胞接种6孔板 | 第48页 |
| 4.2.3.3 转染Kc细胞 | 第48页 |
| 4.2.4 实时荧光定量PCR检测目的基因表达 | 第48-49页 |
| 4.2.4.1 提取细胞RNA | 第49页 |
| 4.2.4.2 逆转录合成cDNA | 第49页 |
| 4.2.4.3 实时荧光定量PCR | 第49页 |
| 4.2.5 细胞毒性检测 | 第49-50页 |
| 4.3 实验结果 | 第50-52页 |
| 4.3.1 PCR扩增目的基因 | 第50页 |
| 4.3.2 重组质粒pIB-TCTP的鉴定 | 第50-51页 |
| 4.3.3 TCTP基因的表达分析 | 第51页 |
| 4.3.4 细胞活力分析 | 第51-52页 |
| 4.4 讨论 | 第52-54页 |
| 第5章 总结 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 在读学位期间的研究成果及发表的学术论文 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62页 |