| CONTENTS | 第6-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 1 前言 | 第15-41页 |
| 1.1 研究的目的和意义 | 第15-16页 |
| 1.2 文献综述 | 第16-38页 |
| 1.2.1 番茄果实中番茄红素研究进展概述 | 第16-21页 |
| 1.2.2 hp基因研究进展 | 第21-24页 |
| 1.2.3 转基因遗传转化方法的研究进展 | 第24-29页 |
| 1.2.4 利用基因工程进行番茄品种改良的研究进展 | 第29-33页 |
| 1.2.5 色素基因在其他作物上的研究进展 | 第33-34页 |
| 1.2.6 Gateway克隆技术在植物中应用进展概述 | 第34-38页 |
| 1.3 主要研究内容 | 第38-40页 |
| 1.3.1 含番茄高色素hp基因突变体的筛选 | 第38页 |
| 1.3.2 番茄再生体系的优化 | 第38页 |
| 1.3.3 目的(hp2)基因全长序列的获取 | 第38-39页 |
| 1.3.4 利用GATEWAY方法构建含目的(hp2)基因表达载体 | 第39页 |
| 1.3.5 番茄对hp2基因的遗传转化研究 | 第39页 |
| 1.3.6 遗传转化株系的鉴定与分析 | 第39-40页 |
| 1.4 技术路线 | 第40-41页 |
| 2 材料与方法 | 第41-66页 |
| 2.1 高色素番茄hp突变体果实品质性状的基础研究 | 第41-44页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第41页 |
| 2.1.2 试验方法 | 第41-44页 |
| 2.1.3 统计分析 | 第44页 |
| 2.2 hp基因的克隆 | 第44-48页 |
| 2.2.1 试验材料 | 第44-45页 |
| 2.2.2 试验方法 | 第45-48页 |
| 2.3 利用GATEWAY克隆技术构建植物表达载体 | 第48-54页 |
| 2.3.1 试验材料 | 第48页 |
| 2.3.3 试验方法 | 第48-54页 |
| 2.4 番茄叶盘法高频再生体系的优化 | 第54-58页 |
| 2.4.1 试验材料 | 第54-55页 |
| 2.4.2 试验方法 | 第55-58页 |
| 2.4.3 统计与分析 | 第58页 |
| 2.5 番茄遗传转化体系的建立 | 第58-61页 |
| 2.5.1 试验材料 | 第58-59页 |
| 2.5.2 试验方法 | 第59-60页 |
| 2.5.3 统计与分析 | 第60-61页 |
| 2.6 番茄hp2基因的功能验证 | 第61-66页 |
| 2.6.1 试验材料 | 第61页 |
| 2.6.2 试验方法 | 第61-66页 |
| 3 结果与分析 | 第66-110页 |
| 3.1 含高色素不同hp基因番茄品种之间品质性状比较及相关性分析 | 第66-73页 |
| 3.1.1 不同hp基因番茄间番茄红素含量比较分析 | 第66-67页 |
| 3.1.2 不同hp基因番茄间果实间产量及品质比较分析 | 第67-72页 |
| 3.1.3 番茄果实品质性状的相关分析 | 第72-73页 |
| 3.2 hp2基因的克隆与检测分析 | 第73-78页 |
| 3.2.1 RNA的提取与检测分析 | 第73页 |
| 3.2.2 RT-PCR扩增hp2基因全长序列分析 | 第73-74页 |
| 3.2.3 胶回收产物的连接、转化与鉴定分析 | 第74-76页 |
| 3.2.4 克隆基因全长的生物信息学比对分析 | 第76-78页 |
| 3.3 pCAMBIA-1301-hp2植物表达载体的构建 | 第78-80页 |
| 3.3.1 带有attB序列hp2全长基因的构建与检测 | 第78-79页 |
| 3.3.2 含有attR的pCAMBIA-1301-ccdB表达载体的构建 | 第79-80页 |
| 3.3.3 pCAMBIA-1301-hp2植物表达载体的鉴定分析 | 第80页 |
| 3.4 耐贮型番茄子叶高频再生体系的优化 | 第80-95页 |
| 3.4.1 不同消毒方法和无菌苗培养基对番茄实生苗发生效果的影响 | 第80-87页 |
| 3.4.2 不同激素与浓度对耐贮型番茄不定芽的诱导和分化的影响 | 第87-93页 |
| 3.4.3 激素6BA+IAA的不同处理水平对番茄品种09836生根的影响 | 第93-95页 |
| 3.5 农杆菌介导的耐贮型番茄09836的遗传转化 | 第95-97页 |
| 3.5.1 pCAMBIA-1301-hp2植物表达载体转化农杆菌的分析 | 第95页 |
| 3.5.2 耐贮型番茄09836的遗传转化 | 第95-97页 |
| 3.6 hp2基因功能的验证分析 | 第97-110页 |
| 3.6.1 T_0代转基因植株DNA检测分析 | 第97-98页 |
| 3.6.2 转hp2基因抗性番茄植株的分子检测分析 | 第98-99页 |
| 3.6.3 转hp2基因抗性番茄植株的半定量RT-PCR检测分析 | 第99-101页 |
| 3.6.4 T_0代转基因植株番茄红素含量及相关叶片生理指标的检测分析 | 第101-105页 |
| 3.6.5 番茄09836转hp2基因后代(T_1和T_2)的遗传稳定性分析 | 第105-110页 |
| 4 讨论 | 第110-121页 |
| 4.1 含不同hp基因番茄果实番茄红素含量与主要品质性状的关系 | 第110-111页 |
| 4.2 影响耐贮型番茄高频再生体系建立的主要因素 | 第111-113页 |
| 4.2.1 外植体类型 | 第111-112页 |
| 4.2.2 无菌苗的培养 | 第112页 |
| 4.2.3 基因型 | 第112页 |
| 4.2.4 激素组合 | 第112-113页 |
| 4.3 影响耐贮型番茄遗传转化的主要因素 | 第113-114页 |
| 4.3.1 预培养 | 第113-114页 |
| 4.3.2 侵染时间 | 第114页 |
| 4.3.3 共培养时间 | 第114页 |
| 4.4 在耐贮型番茄转基因过程中应注意的几个问题 | 第114-115页 |
| 4.5 利用Gateway构建表达载体的优越性 | 第115-116页 |
| 4.5.1 带有attB位点目的片段 | 第115-116页 |
| 4.5.2 构建适合的带有attR重组位点的植物表达载体 | 第116页 |
| 4.6 番茄转基植株的后期检测验证探讨 | 第116-118页 |
| 4.6.1 PCR扩增检测 | 第116-117页 |
| 4.6.2 半定量RT-PCR检测 | 第117页 |
| 4.6.3 生理指标的检测 | 第117-118页 |
| 4.7 hp2基因遗传机制及其利用展望 | 第118-120页 |
| 4.7.1 hp2基因的调控功能及分子机制 | 第118-119页 |
| 4.7.2 hp2基因的利用及展望 | 第119-120页 |
| 4.8 创新点 | 第120-121页 |
| 5 结论 | 第121-123页 |
| 致谢 | 第123-124页 |
| 参考文献 | 第124-138页 |
| 附录 | 第138-140页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第140页 |
