| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第12-32页 |
| 1.1 引言 | 第12页 |
| 1.2 精子发生过程简介 | 第12-14页 |
| 1.2.1 增殖期 | 第13页 |
| 1.2.2 减数分裂期 | 第13页 |
| 1.2.3 精子形成期 | 第13-14页 |
| 1.3 精子发生中基因表达转录水平的调控 | 第14-18页 |
| 1.3.1 激素对精子发生的转录调控机制 | 第15-16页 |
| 1.3.2 转录因子对精子发生的转录调控机制 | 第16-17页 |
| 1.3.3 染色质相关因子对精子发生的转录调控机制 | 第17-18页 |
| 1.4 精子发生中基因表达转录后水平的调控 | 第18-24页 |
| 1.4.1 真核细胞mRNA的UTR与基因表达 | 第18-20页 |
| 1.4.2 精子发生中RNA的选择性剪切和多腺苷酸化过程 | 第20-21页 |
| 1.4.3 调节精子发生过程的RNA结合蛋白 | 第21-22页 |
| 1.4.4 精子发生过程中的非编码小RNA | 第22-24页 |
| 1.5 拟染色小体在精子发生中的功能 | 第24-26页 |
| 1.6 PABPC1和PIWIL1蛋白在小鼠精子发生中的研究 | 第26-30页 |
| 1.6.1 PABPC1在小鼠精子发生中作用和功能的研究 | 第26-28页 |
| 1.6.2 PIWIL1在小鼠精子发生中作用和功能的研究 | 第28-30页 |
| 1.7 选题依据及研究内容 | 第30-32页 |
| 第二章 实验方法与实验步骤 | 第32-51页 |
| 2.1 小鼠基因组DNA的提取 | 第32页 |
| 2.2 小鼠睾丸组织总RNA的提取 | 第32-33页 |
| 2.3 小鼠睾丸组织CDNA的合成 | 第33-34页 |
| 2.4 载体构建 | 第34-36页 |
| 2.5 蛋白的表达与纯化 | 第36-39页 |
| 2.5.1 原核蛋白的诱导表达 | 第36页 |
| 2.5.2 纯化重组蛋白 | 第36-37页 |
| 2.5.3 Bradford法检测纯化蛋白的浓度 | 第37页 |
| 2.5.4 蛋白质免疫印迹(Western Blot) | 第37-39页 |
| 2.6 RNA-EMSA实验 | 第39-42页 |
| 2.6.1 生物素探针的制备 | 第39-40页 |
| 2.6.2 配制非变性聚丙烯酰胺凝胶 | 第40页 |
| 2.6.3 RNA探针与蛋白的结合 | 第40-41页 |
| 2.6.4 生物素标记探针的检测 | 第41-42页 |
| 2.7 免疫共沉淀实验 | 第42-43页 |
| 2.8 293T细胞的培养 | 第43-44页 |
| 2.8.1 细胞复苏 | 第43页 |
| 2.8.2 细胞传代 | 第43页 |
| 2.8.3 细胞计数 | 第43-44页 |
| 2.8.4 细胞冻存 | 第44页 |
| 2.8.5 细胞转染 | 第44页 |
| 2.9 GST PULL-DOWN实验 | 第44-45页 |
| 2.9.1 GST pull-down睾丸组织裂解液 | 第44-45页 |
| 2.9.2 GST pull-down睾丸组织裂解液后的RNA检测 | 第45页 |
| 2.10 免疫荧光染色和荧光原位杂交 | 第45-48页 |
| 2.10.1 重力沉降法分离成熟睾丸的生精细胞 | 第45-46页 |
| 2.10.2 免疫荧光染色和原位杂交中盖玻片的处理方法 | 第46页 |
| 2.10.3 生精细胞的免疫荧光染色实验 | 第46-47页 |
| 2.10.4 293T细胞的免疫荧光染色实验 | 第47页 |
| 2.10.5 生精细胞的荧光原位杂交(FISH) | 第47-48页 |
| 2.11 双荧光素酶报告系统检测翻译效率 | 第48-49页 |
| 2.11.1 双荧光素酶系统报告基因翻译水平的检测 | 第48页 |
| 2.11.2 双荧光素酶系统中报告基因转录水平的检测 | 第48-49页 |
| 2.12 蔗糖密度梯度离心分离核糖体 | 第49-51页 |
| 2.12.1 蔗糖梯度的制备 | 第49-50页 |
| 2.12.2 小鼠睾丸组织裂解液或293T细胞裂解液的制备 | 第50页 |
| 2.12.3 梯度离心 | 第50页 |
| 2.12.4 组分收集 | 第50页 |
| 2.12.5 数据分析 | 第50-51页 |
| 第三章 实验数据与实验结果 | 第51-75页 |
| 3.1 PABPC1蛋白与PIWIL1蛋白相互作用的实验结果 | 第51-56页 |
| 3.1.1 小鼠睾丸组织中PABPC1蛋白和PIWIL1蛋白相互作用验证 | 第51-53页 |
| 3.1.2 293T细胞中PABPC1蛋白和PIWIL1蛋白相互作用的验证 | 第53-54页 |
| 3.1.3 PABPC1和PIWIL1蛋白相互作用结构域的研究 | 第54-56页 |
| 3.2 PABPC1与PIWIL1蛋白复合物中RNA的检测结果 | 第56-62页 |
| 3.2.1 不同核酸酶处理对免疫共沉淀实验和GST pull-down实验的影响 | 第56-58页 |
| 3.2.2 GST pull-down后RNA的检测 | 第58-59页 |
| 3.2.3 RNA-EMSA实验 | 第59-60页 |
| 3.2.4 Akap3、Tnp2、Prm2的mRNA和PIWIL1蛋白在生精细胞中的共定位 | 第60-62页 |
| 3.3 PABPC1和PIWIL1对翻译调控的研究 | 第62-75页 |
| 3.3.1 双荧光素酶报告系统中PABPC1和PIWIL1的翻译调控功能的检测 | 第62-67页 |
| 3.3.2 蔗糖密度梯度离心实验对PABPC1和PIWIL1蛋白的翻译调控功能的检测 | 第67-75页 |
| 第四章 讨论 | 第75-80页 |
| 4.1 PABPC1和PIWIL1在生精细胞中的结合方式 | 第75-76页 |
| 4.2 PABPC1和PIWIL1的相互作用在生精细胞中的功能 | 第76-77页 |
| 4.3 靶基因MRNA的UTR与基因表达 | 第77-78页 |
| 4.4 展望 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 附录一 实验材料与试剂 | 第90-99页 |
| 附录二 图表中的原始数据 | 第99-104页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 | 第104页 |
