| 摘要 | 第8-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-31页 |
| 1 黑米资源 | 第11-12页 |
| 1.1 黑米的起源 | 第11页 |
| 1.2 中国的黑米资源 | 第11-12页 |
| 1.3 中国的黑米育种研究及其育成品种 | 第12页 |
| 2 黑米的营养价值 | 第12-16页 |
| 2.1 黑米的营养成分 | 第12-14页 |
| 2.2 黑米的保健功效 | 第14-16页 |
| 3 黑米的种皮色素 | 第16-28页 |
| 3.1 类黄酮化合物 | 第16-17页 |
| 3.2 黑米种皮色素花青素 | 第17-20页 |
| 3.3 花青素的生物合成 | 第20页 |
| 3.4 花青素生物合成的主要结构基因 | 第20-25页 |
| 3.4.1 查尔酮合酶(chalcone synthase,CHS) | 第20-21页 |
| 3.4.2 查尔酮异构酶(chalcone isomerase,CHI) | 第21-22页 |
| 3.4.3 黄烷酮-3-羟化酶(flavanone-3-hydroxylase,F3H) | 第22页 |
| 3.4.4 黄烷酮-3’-羟化酶(flavanone-3’hydroxylase,F3’H) | 第22-23页 |
| 3.4.5 黄烷酮-3’5’-羟化酶(flavanone-3’5’hydroxylase,F3’5’H) | 第23页 |
| 3.4.6 二氢黄酮醇-4-还原酶(dihydroflavonol-4-reductase,DFR) | 第23-24页 |
| 3.4.7 花青素合酶(anthocyanidin synthesis,ANS) | 第24-25页 |
| 3.5 花青素生物合成的调节基因 | 第25-28页 |
| 4 种皮颜色的遗传研究进展 | 第28-30页 |
| 4.1 种皮黑色素的遗传分析 | 第28-29页 |
| 4.2 种皮色素相关基因的定位 | 第29-30页 |
| 4.3 Ra基因的相关基因的报道 | 第30页 |
| 5 本研究的目的和意义 | 第30-31页 |
| 第二章 黑色种皮基因的定位 | 第31-49页 |
| 1 材料与方法 | 第32-34页 |
| 1.1 供试材料与群体构建 | 第32页 |
| 1.2 性状调查 | 第32页 |
| 1.3 叶片基因组DNA的提取 | 第32-33页 |
| 1.4 分子标记的筛选及初步定位 | 第33页 |
| 1.5 分子标记的自行开发及精细定位 | 第33-34页 |
| 1.5.1 InDel标记的开发 | 第33页 |
| 1.5.2 CAPs标记的开发 | 第33-34页 |
| 1.6 基因预测 | 第34页 |
| 2 结果与分析 | 第34-46页 |
| 2.1 分子标记的开发 | 第34-36页 |
| 2.2 甜黑米黑色种皮性状的遗传分析 | 第36-43页 |
| 2.2.1 黑色种皮的遗传机制 | 第36-38页 |
| 2.2.2 黑色种皮基因的初定位及其验证 | 第38-43页 |
| 2.3 黑色种皮基因的精细定位 | 第43-45页 |
| 2.4 基因预测与候选基因分析 | 第45-46页 |
| 3 讨论 | 第46-49页 |
| 第三章 候选基因RA的克隆、表达谱及功能分析 | 第49-71页 |
| 1 材料与方法 | 第50-58页 |
| 1.1 供试材料 | 第50页 |
| 1.2 叶片基因组DNA的提取 | 第50页 |
| 1.3 各组织中RNA的提取 | 第50页 |
| 1.4 Ra基因的序列分析 | 第50-51页 |
| 1.5 Ra基因的多态性差异分析 | 第51-52页 |
| 1.6 Ra基因的关联分析 | 第52页 |
| 1.7 Ra基因的表达分析 | 第52-53页 |
| 1.8 载体构建 | 第53-56页 |
| 1.8.1 Ra表达载体的构建 | 第53-54页 |
| 1.8.2 Ra过表达载体的构建 | 第54页 |
| 1.8.3 Ra干扰载体的构建 | 第54-55页 |
| 1.8.4 Ra promoter-GUS表达载体的构建 | 第55页 |
| 1.8.5 细胞定位载体的构建 | 第55-56页 |
| 1.9 农杆菌介导植物基因转化水稻程序 | 第56-57页 |
| 1.9.1 诱导水稻愈伤组织 | 第56页 |
| 1.9.2 农杆菌介导植物基因转化 | 第56-57页 |
| 1.10 Ra基因的瞬时表达 | 第57-58页 |
| 1.10.1 种子的处理 | 第57页 |
| 1.10.2 金粉微弹的制备 | 第57页 |
| 1.10.3 质粒DNA包被微弹(2枪) | 第57页 |
| 1.10.4 轰击及培养 | 第57-58页 |
| 2 结果与分析 | 第58-68页 |
| 2.1 Ra基因的测序与关联分析 | 第58-62页 |
| 2.1.1 Ra基因的序列分析 | 第58-61页 |
| 2.1.2 Ra基因的关联分析 | 第61-62页 |
| 2.2 Ra基因的表达分析 | 第62-64页 |
| 2.3 Ra基因的功能互补验证 | 第64-68页 |
| 2.3.1 载体的构建 | 第64-67页 |
| 2.3.2 Ra基因的瞬时表达 | 第67页 |
| 2.3.3 转基因结果 | 第67-68页 |
| 3 讨论 | 第68-71页 |
| 第四章 全文结论 | 第71-73页 |
| 1 黑色种皮基因的遗传分析 | 第71-72页 |
| 1.1 黑色种皮的遗传机制 | 第71页 |
| 1.2 黑色种皮基因的图位克隆 | 第71-72页 |
| 2 候选基因RA的克隆与表达分析 | 第72-73页 |
| 2.1 Ra基因的序列分析 | 第72页 |
| 2.2 Ra基因的表达分析 | 第72页 |
| 2.3 Ra基因的功能互补验证 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-83页 |
| 附录 | 第83-89页 |
| 1 总DNA的提取(SDS法)及检测 | 第83-84页 |
| 1.1 溶液配制 | 第83页 |
| 1.2 DNA提取步骤 | 第83-84页 |
| 1.3 DNA浓度及质量的检测 | 第84页 |
| 2 PCR分析及SSR标记检测 | 第84-86页 |
| 2.1 PCR试剂 | 第84-85页 |
| 2.2 PCR反应 | 第85页 |
| 2.3 PCR产物的检测 | 第85-86页 |
| 2.3.1 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第85-86页 |
| 2.3.2 琼脂糖凝胶电泳 | 第86页 |
| 3 植物总RNA的提取 | 第86-87页 |
| 3.1 RNAprep pure植物总RNA提取试剂盒提取水稻总RNA | 第86-87页 |
| 4 质粒提取与连接转化的方法 | 第87-89页 |
| 4.1 质粒提取方法 | 第87-88页 |
| 4.2 连接反应与转化 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89页 |
