| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 缩略词表 | 第11-13页 |
| 引言 | 第13-15页 |
| 第一部分 重组质粒 neu-hsp70 构建表达 | 第15-33页 |
| ·前言 | 第15页 |
| ·材料 | 第15-18页 |
| ·主要试剂 | 第15页 |
| ·主要仪器设备 | 第15-16页 |
| ·主要溶液的配制 | 第16-18页 |
| ·方法 | 第18-28页 |
| ·引物设计 | 第18页 |
| ·细胞总 RNA 的提取 | 第18-19页 |
| ·RT-PCR 克隆 Her2/neu,Hsp70 | 第19-21页 |
| ·胶回收 Her2、Hsp70 基因片段 | 第21-22页 |
| ·连接反应 | 第22页 |
| ·制备感受态细胞 | 第22-23页 |
| ·转化 | 第23页 |
| ·质粒小提及酶切鉴定 | 第23-24页 |
| ·细胞培养及转染 | 第24-25页 |
| ·细胞总蛋白的提取 | 第25页 |
| ·细胞总蛋白定量（BCA 法） | 第25-26页 |
| ·SDS-PAGE 凝胶电泳 | 第26-27页 |
| ·Western Blot | 第27-28页 |
| ·结果 | 第28-30页 |
| ·目的基因 Her2、Hsp70 的扩增 | 第28页 |
| ·PCR 产物与 T 载体连接转化，提取的质粒的酶切鉴定结果 | 第28页 |
| ·目的片段与载体 pcDNA3.1 双酶切连接、转化、提取质粒的鉴定 | 第28-29页 |
| ·重组质粒的连接鉴定 | 第29-30页 |
| ·Her2 在 4T-1 细胞中的表达 | 第30页 |
| ·讨论 | 第30-33页 |
| 第二部分 重组质粒的抗肿瘤作用 | 第33-43页 |
| ·前言 | 第33页 |
| ·材料 | 第33-34页 |
| ·细菌株、细胞株及主要试剂 | 第33-34页 |
| ·主要试剂的配制 | 第34页 |
| ·主要仪器设备 | 第34页 |
| ·方法 | 第34-36页 |
| ·无内毒素质粒大量的提取 | 第34页 |
| ·动物实验 | 第34-35页 |
| ·流式细胞分析荷瘤鼠脾脏 T 细胞亚群 | 第35页 |
| ·ELISA 的检测 | 第35页 |
| ·流式仪检测鼠血清抗 Her2 抗体 | 第35-36页 |
| ·结果 | 第36-40页 |
| ·基因疫苗对荷瘤小鼠乳腺癌生长的影响 | 第36页 |
| ·荷瘤小鼠病理切片结果 | 第36-37页 |
| ·基因疫苗对荷瘤小鼠 T 细胞亚群的影响 | 第37-38页 |
| ·基因疫苗对荷瘤小鼠血清 IFN-γ、IL-4 含量的影响 | 第38-39页 |
| ·基因疫苗对荷瘤小鼠血清 Her2 抗体含量的影响 | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第40-43页 |
| 结论 | 第43-45页 |
| 参考文献 | 第45-49页 |
| 文献综述 | 第49-58页 |
| 参考文献 | 第54-58页 |
| 致谢 | 第58-61页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第61-62页 |
