中文摘要 | 第8-10页 |
Abstract | 第10-11页 |
第一章 大肠杆菌SILAC方法研究 | 第12-46页 |
1.1 研究背景 | 第12-13页 |
1.2 材料与仪器 | 第13-17页 |
1.2.1 菌株 | 第13-14页 |
1.2.2 试剂 | 第14页 |
1.2.3 主要溶液的配制 | 第14-17页 |
1.2.4 仪器 | 第17页 |
1.3 实验方法 | 第17-30页 |
1.3.1 培养基基础成分及浓度的确定 | 第17-20页 |
1.3.2 生长曲线的测定 | 第20页 |
1.3.3 重标氨基酸的选择 | 第20-21页 |
1.3.4 精氨酸重标及标记效率测试 | 第21-23页 |
1.3.5 赖氨酸重标及标记效率的检测 | 第23-24页 |
1.3.6 无谷氨酸,有机物加倍,赖氨酸重标及标记效率的检测 | 第24-25页 |
1.3.7 无谷氨酸和天冬氨酸,赖氨酸重标及标记效率的检测 | 第25-27页 |
1.3.8 无谷氨酸和天冬氨酸,添加铵盐,赖氨酸重标及标记效率的检测 | 第27-28页 |
1.3.9 比较几种重标培养基中菌体的生长速度 | 第28-30页 |
1.4 结果与讨论 | 第30-45页 |
1.4.1 M9结合SC氨基酸组成培养条件下的生长曲线 | 第30-32页 |
1.4.2 精氨酸标记效率 | 第32-33页 |
1.4.3 赖氨酸标记效率 | 第33-35页 |
1.4.4 无谷氨酸,有机物加倍的条件下,赖氨酸重标的标记效率 | 第35-38页 |
1.4.5 无谷氨酸和天冬氨酸条件下,重标赖氨酸标记效率 | 第38-40页 |
1.4.6 无谷氨酸和天冬氨酸,添加铵盐的条件下赖氨酸重标效率的检测 | 第40-43页 |
1.4.7 几种大肠杆菌标记方法的生长曲线的比较 | 第43-45页 |
1.5 小结 | 第45-46页 |
第二章 零差异实验确定数据过滤标准 | 第46-54页 |
2.1 研究背景 | 第46页 |
2.2 材料与仪器 | 第46-47页 |
2.3 实验方法 | 第47-48页 |
2.3.1 purenull实验样品的制备 | 第47页 |
2.3.2 液质联用 | 第47页 |
2.3.3 数据分析 | 第47-48页 |
2.4 结果与讨论 | 第48-52页 |
2.4.1 蛋白鉴定及定量 | 第48页 |
2.4.2 不同S/N卡值下的蛋白鉴定及定量 | 第48-51页 |
2.4.3 定量精度分析 | 第51-52页 |
2.5 小结 | 第52-54页 |
第三章 SILAC方法比较IPTG诱导前后蛋白质组变化 | 第54-75页 |
3.1 背景介绍 | 第54-55页 |
3.2 材料与仪器 | 第55页 |
3.3 实验方法 | 第55-60页 |
3.3.1 比较有无IPTG处理条件下生长速度的变化 | 第55-56页 |
3.3.2 SDS-PAGE比较表达差异 | 第56页 |
3.3.3 SILAC标记实验 | 第56-57页 |
3.3.4 SILAC正标实验,即诱导前轻标与诱导后重标混合后分析 | 第57-58页 |
3.3.5 SILAC反标实验,即诱导前重标与诱导后轻标混合后进行分析 | 第58页 |
3.3.6 电泳定量 | 第58-59页 |
3.3.7 信号通路分析 | 第59页 |
3.3.8 电镜检测诱导前后菌体形态变化 | 第59-60页 |
3.3.9 目标蛋白可溶性分析 | 第60页 |
3.4 结果与讨论 | 第60-73页 |
3.4.1 生长曲线的比较 | 第60-62页 |
3.4.2 SDS-PAGE电泳比较图 | 第62-63页 |
3.4.3 SILAC正标(诱导前轻标vs诱导后重标)实验结果分析 | 第63-64页 |
3.4.4 SILAC反标(诱导前重标vs诱导后轻标)实验结果分析 | 第64-65页 |
3.4.5 考马斯亮蓝染色比较内源蛋白表达量变化 | 第65-67页 |
3.4.6 信号通路分析 | 第67-71页 |
3.4.7 诱导前后菌体表面积及形态的变化 | 第71-72页 |
3.4.8 目标蛋白可溶性分析 | 第72-73页 |
3.5 小结 | 第73-75页 |
综述 | 第75-84页 |
参考文献 | 第84-89页 |
在读期间发表与待发表的文章 | 第89-91页 |
致谢 | 第91-92页 |
附表 | 第92-200页 |
附表1:缩略词表 | 第92-94页 |
附表2:诱导后在两组SILAC试验中log2Ratio(before/after)值均大于0.2的蛋白 | 第94-95页 |
附表3:诱导后在两组SILAC实验中log2Ratio(before/after)值介于-0.2之0.2之间的蛋白 | 第95-98页 |
附表4:诱导后在两组SILAC实验中log2Ratio(before/after)值都大于0.2,即诱导后表达下调的蛋白 | 第98-162页 |
附表5:其他共同定量的蛋白 | 第162-171页 |
附表6:其他鉴定蛋白 | 第171-200页 |