| 中文摘要 | 第5-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 英文缩写词 | 第15-16页 |
| 第1章 绪论 | 第16-38页 |
| 1.1 透明颤菌血红蛋白简介 | 第17-20页 |
| 1.1.1 透明颤菌概述 | 第17-18页 |
| 1.1.2 透明颤菌血红蛋白简介 | 第18-19页 |
| 1.1.3 透明颤菌血红蛋白的结构特性 | 第19-20页 |
| 1.2 透明颤菌血红蛋白的生物学功能 | 第20-28页 |
| 1.2.1 透明颤菌血红蛋白的氧结合功能 | 第20-21页 |
| 1.2.2 利用透明颤菌血红蛋白突变体研究其结构与功能 | 第21-23页 |
| 1.2.3 透明颤菌血红蛋白与配体的相互作用特性 | 第23页 |
| 1.2.4 透明颤菌血红蛋白调控基因表达的特性 | 第23-26页 |
| 1.2.5 透明颤菌血红蛋白对生物体代谢的影响 | 第26-27页 |
| 1.2.6 透明颤菌血红蛋白的过氧化物酶功能 | 第27-28页 |
| 1.3 透明颤菌血红蛋白的基因工程应用 | 第28-31页 |
| 1.3.1 透明颤菌血红蛋白在生物降解上的应用 | 第28-30页 |
| 1.3.2 透明颤菌血红蛋白在生产工业上的应用 | 第30-31页 |
| 1.4 蛋白质研究中的实验技术 | 第31-38页 |
| 1.4.1 动态光散射在蛋白质研究中的应用 | 第31-33页 |
| 1.4.2 生物膜干涉技术在蛋白质中的应用 | 第33-34页 |
| 1.4.3 圆二色性光谱在解析蛋白质结构中的应用 | 第34-36页 |
| 1.4.4 荧光光谱在蛋白质构象研究中的应用 | 第36-38页 |
| 第2章 透明颤菌血红蛋白的表达及纯化 | 第38-54页 |
| 2.1 实验仪器、材料和试剂 | 第38-41页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第38-39页 |
| 2.1.2 实验材料 | 第39页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第39-41页 |
| 2.2 实验方法 | 第41-46页 |
| 2.2.1 实验流程 | 第41-42页 |
| 2.2.2 建立透明颤菌血红蛋白表达菌株 | 第42-44页 |
| 2.2.2.1 重组质粒转入大肠杆菌 | 第42-43页 |
| 2.2.2.2 质粒提取及验证 | 第43-44页 |
| 2.2.3 透明颤菌血红蛋白的表达 | 第44-45页 |
| 2.2.4 透明颤菌血红蛋白的纯化 | 第45-46页 |
| 2.2.4.1 破碎大肠杆菌细胞 | 第45页 |
| 2.2.4.2 硫酸铵盐析 | 第45页 |
| 2.2.4.3 离子交换层析 | 第45页 |
| 2.2.4.4 凝胶过滤层析 | 第45-46页 |
| 2.2.4.5 SDS-PAGE | 第46页 |
| 2.2.4.6 紫外可见吸收光谱 | 第46页 |
| 2.2.4.7 还原态样品制备 | 第46页 |
| 2.3 实验结果与讨论 | 第46-52页 |
| 2.3.1 表达菌体的构建及验证 | 第46-47页 |
| 2.3.2 透明颤菌血红蛋白的表达 | 第47-48页 |
| 2.3.3 两次硫酸铵沉淀 | 第48-49页 |
| 2.3.4 离子交换层析 | 第49-50页 |
| 2.3.5 凝胶过滤层析 | 第50-51页 |
| 2.3.6 透明颤菌血红蛋白纯度与分子量检测 | 第51-52页 |
| 2.3.7 还原态透明颤菌血红蛋白的制备 | 第52页 |
| 2.4 小结 | 第52-54页 |
| 第3章 PH 依赖下的透明颤菌血红蛋白结构改变对酶活性的影响 | 第54-68页 |
| 3.1 实验方法 | 第54-55页 |
| 3.1.1 动态光散射方法测定透明颤菌血红蛋白分子大小 | 第54页 |
| 3.1.2 两个亚基之间的相互作用力 | 第54-55页 |
| 3.1.3 圆二色性光谱的测定 | 第55页 |
| 3.1.4 荧光光谱的测定 | 第55页 |
| 3.1.5 过氧化物酶活性 | 第55页 |
| 3.2 实验结果 | 第55-66页 |
| 3.2.1 动态光散射分析 VHb 分子的大小 | 第55-58页 |
| 3.2.2 pH 依赖的单体-二聚体结构的改变 | 第58-62页 |
| 3.2.2.1 pH 依赖的 VHb 自身相互作用性质 | 第58-60页 |
| 3.2.2.2 pH 依赖的 VHb 荧光发射光谱 | 第60-61页 |
| 3.2.2.3 pH 依赖的 VHb 圆二色性光谱 | 第61-62页 |
| 3.2.2.4 pH 依赖的紫外吸收光谱 | 第62页 |
| 3.2.3 单体表现出具有最高的过氧化物酶活性 | 第62-64页 |
| 3.2.4 VHb 同源二聚体的两种模型推测 | 第64-66页 |
| 3.3 小结 | 第66-68页 |
| 第4章 透明颤菌血红蛋白及其突变体对亚甲基蓝的脱色作用 | 第68-84页 |
| 4.1 试验方法 | 第68-72页 |
| 4.1.1 突变体的构建 | 第68-71页 |
| 4.1.1.1 引物设计 | 第68页 |
| 4.1.1.2 利用 PCR 技术建立突变表达载体 | 第68-69页 |
| 4.1.1.3 PCR 产物的纯化及模板去除 | 第69-70页 |
| 4.1.1.4 突变质粒转入大肠杆菌 | 第70页 |
| 4.1.1.5 质粒提取及验证 | 第70-71页 |
| 4.1.2 突变体的表达与纯化 | 第71页 |
| 4.1.3 亚甲基蓝的降解 | 第71-72页 |
| 4.1.4 圆二色性光谱的测定 | 第72页 |
| 4.1.5 荧光光谱的测定 | 第72页 |
| 4.1.6 蛋白质热稳定性的检测 | 第72页 |
| 4.2 实验结果 | 第72-82页 |
| 4.2.1 VHb 突变体的构建 | 第72-74页 |
| 4.2.2 VHb 突变体的纯化 | 第74-75页 |
| 4.2.3 野生型 VHb 对纺织染料的漂白作用 | 第75-76页 |
| 4.2.4 VHb 突变体对纺织染料的漂白作用 | 第76-78页 |
| 4.2.5 紫外吸收光谱性质 | 第78-79页 |
| 4.2.6 VHb 突变体的结构分析 | 第79-82页 |
| 4.3 小结 | 第82-84页 |
| 第5章 总结 | 第84-86页 |
| 参考文献 | 第86-102页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 | 第102-104页 |
| 致谢 | 第104页 |
