| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第12-34页 |
| 1.1 海绵及海绵共附生微生物 | 第12-21页 |
| 1.1.1 海绵 | 第12-13页 |
| 1.1.2 海绵共附生微生物 | 第13-21页 |
| 1.2 海绵氮循环微生物及海洋脲酶的研究进展 | 第21-26页 |
| 1.2.1 海绵氮循环微生物 | 第21-22页 |
| 1.2.2 海洋脲酶的研究进展 | 第22-26页 |
| 1.3 宏基因组筛选脂肪酶的研究进展 | 第26-32页 |
| 1.3.1 宏基因组技术的概述 | 第26-28页 |
| 1.3.2 微生物脂肪酶的研究进展 | 第28-32页 |
| 1.4 研究目的、内容、意义 | 第32-33页 |
| 1.4.1 研究目的 | 第32页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第32页 |
| 1.4.3 研究意义 | 第32-33页 |
| 1.5 创新点 | 第33-34页 |
| 第二章 海绵 X.TESTUDINARIA 共附生微生物中脲酶基因在 DNA 水平上的系统发育分析 | 第34-49页 |
| 2.1 实验材料 | 第34页 |
| 2.2 实验方法 | 第34-38页 |
| 2.2.1 海绵 X.testudinaria 总 DNA 的提取 | 第34-35页 |
| 2.2.2 目的基因的 PCR 扩增及克隆文库的构建 | 第35-37页 |
| 2.2.3 系统发育分析 | 第37-38页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第38-47页 |
| 2.3.1 海绵 X.testudinaria 总 DNA 的提取 | 第38页 |
| 2.3.2 目的基因的 PCR 扩增及克隆文库的扩建 | 第38-39页 |
| 2.3.3 系统发育分析 | 第39-47页 |
| 2.4 本章小结 | 第47-49页 |
| 第三章 海绵 HALICHONDRIA REGOSA 中脲酶产生菌的筛选及酶学性质的研究 | 第49-58页 |
| 3.1 实验材料 | 第49页 |
| 3.2 实验方法 | 第49-53页 |
| 3.2.1 脲酶产生菌的筛选 | 第49-50页 |
| 3.2.2 脲酶产生菌的鉴定 | 第50-51页 |
| 3.2.3 脲酶产生菌粗酶液酶学活性的测定 | 第51-53页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第53-57页 |
| 3.3.1 脲酶产生菌的筛选 | 第53页 |
| 3.3.2 脲酶产生菌的鉴定 | 第53-54页 |
| 3.3.3 脲酶产生菌粗酶液酶学活性的测定 | 第54-57页 |
| 3.4 本章小结 | 第57-58页 |
| 第四章 海绵 IRCINIA SP.宏基因组文库的构建 | 第58-66页 |
| 4.1 实验材料 | 第58页 |
| 4.2 实验方法 | 第58-62页 |
| 4.2.1 海绵 Ircinia sp.总 DNA 的提取 | 第58页 |
| 4.2.2 海绵 Ircinia sp.总 DNA 的不完全酶切 | 第58-59页 |
| 4.2.3 pUC18 质粒的完全酶切 | 第59-60页 |
| 4.2.4 DNA 和质粒酶切片段回收 | 第60页 |
| 4.2.5 酶切后产物进行去磷酸化处理 | 第60-61页 |
| 4.2.6 目的片段与 pUC18 载体连接与转化 | 第61页 |
| 4.2.7 宏基因组文库质量检测 | 第61页 |
| 4.2.8 宏基因组文库的保种 | 第61-62页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第62-65页 |
| 4.3.1 海绵 Ircinia sp.总 DNA 的提取 | 第62页 |
| 4.3.2 海绵 Ircinia sp.总 DNA 的不完全酶切 | 第62-63页 |
| 4.3.3 pUC18 质粒的完全酶切 | 第63页 |
| 4.3.4 DNA 和质粒酶切片段回收 | 第63-64页 |
| 4.3.5 酶切后产物进行去磷酸化处理 | 第64页 |
| 4.3.6 目的片段与 pUC18 载体连接与转化 | 第64页 |
| 4.3.7 宏基因组文库质量检测 | 第64-65页 |
| 4.3.8 宏基因组文库的保种 | 第65页 |
| 4.4 本章小结 | 第65-66页 |
| 第五章 海绵 IRCINIA SP.宏基因组文库中脂肪酶基因的筛选、克隆、表达、纯化及活性研究 | 第66-91页 |
| 5.1 实验材料 | 第66页 |
| 5.2 实验方法 | 第66-75页 |
| 5.2.1 脂肪酶阳性克隆的筛选 | 第66页 |
| 5.2.2 含脂肪酶基因原核表达载体的构建 | 第66-70页 |
| 5.2.3 脂肪酶基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第70页 |
| 5.2.4 脂肪酶表达蛋白的纯化及复性 | 第70-72页 |
| 5.2.5 脂肪酶表达蛋白活性的测定 | 第72-75页 |
| 5.2.6 脂肪酶酶动力学参数的测定 | 第75页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第75-89页 |
| 5.3.1 脂肪酶阳性克隆的筛选 | 第75-76页 |
| 5.3.2 含脂肪酶基因原核表达载体的构建 | 第76-80页 |
| 5.3.3 脂肪酶基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第80-81页 |
| 5.3.4 脂肪酶表达蛋白的纯化及复性 | 第81-84页 |
| 5.3.5 脂肪酶表达蛋白活性的测定 | 第84-88页 |
| 5.3.6 脂肪酶动力学参数的测定 | 第88-89页 |
| 5.4 本章小结 | 第89-91页 |
| 第六章 结束语 | 第91-94页 |
| 6.1 主要工作总结 | 第91-92页 |
| 6.2 展望 | 第92-94页 |
| 参考文献 | 第94-109页 |
| 附录1.实验中所用到的仪器设备 | 第109-110页 |
| 附录2.实验中所用到的试剂及培养基配制 | 第110-113页 |
| 致谢 | 第113-114页 |
| 待发表论文 | 第114页 |
