| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1 引言 | 第12-21页 |
| 1.1 抗虫基因来源及杀虫机理 | 第12-13页 |
| 1.2 转 Bt 基因植物研究 | 第13-14页 |
| 1.3 BADH 基因的调节机制和研究进展 | 第14-15页 |
| 1.4 多基因聚合技术研究进展 | 第15-17页 |
| 1.4.1 杂交法 | 第15页 |
| 1.4.2 构建多个表达载体进行多次转化 | 第15-16页 |
| 1.4.3 多载体的共转化 | 第16页 |
| 1.4.4 构建多基因单载体进行一次转化 | 第16-17页 |
| 1.5 转基因植物的筛选和鉴定方法 | 第17-19页 |
| 1.5.1 标记基因 | 第17-18页 |
| 1.5.2 DNA 水平的分子检测 | 第18页 |
| 1.5.3 转录水平的分子检测 | 第18-19页 |
| 1.5.4 翻译水平的分子检测 | 第19页 |
| 1.6 抗虫基因和耐盐基因在杨树中的应用现状 | 第19-20页 |
| 1.7 本试验的研究目的和意义 | 第20-21页 |
| 2 双价基因植物转化载体对烟草的遗传转化 | 第21-45页 |
| 2.1 材料 | 第21-24页 |
| 2.1.1 植物材料和测试昆虫 | 第21页 |
| 2.1.2 菌株、载体 | 第21页 |
| 2.1.3 酶及生化试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.4 主要试剂和培养基的配制 | 第22-23页 |
| 2.1.5 试验所用 PCR 引物 | 第23-24页 |
| 2.1.6 主要仪器 | 第24页 |
| 2.2 方法 | 第24-33页 |
| 2.2.1 Kan 临界浓度的确定 | 第24-25页 |
| 2.2.2 Cef 使用浓度的确定 | 第25页 |
| 2.2.3 农杆菌侵染液的制备 | 第25-28页 |
| 2.2.4 农杆菌介导的叶盘法转基因 | 第28页 |
| 2.2.5 转基因株系的 PCR 检测 | 第28-30页 |
| 2.2.6 转基因株系的荧光定量 PCR 检测 | 第30-31页 |
| 2.2.7 ELISA 检测 BtCry1Ac 毒蛋白 | 第31-32页 |
| 2.2.8 抗性试验 | 第32-33页 |
| 2.3 结果与分析 | 第33-44页 |
| 2.3.1 Kan 及 Cef 浓度的确定 | 第33-35页 |
| 2.3.2 农杆菌侵染液的制备 | 第35-36页 |
| 2.3.3 转基因株系的获得 | 第36-37页 |
| 2.3.4 转基因株系的 PCR 检测 | 第37-38页 |
| 2.3.5 荧光定量 PCR 鉴定 | 第38-40页 |
| 2.3.6 BtCry1Ac 毒蛋白的表达量 | 第40-41页 |
| 2.3.7 抗性试验 | 第41-44页 |
| 2.4 小结 | 第44-45页 |
| 3 三价基因转化载体对烟草的遗传转化 | 第45-62页 |
| 3.1 材料 | 第45-47页 |
| 3.1.1 植物材料和供试昆虫 | 第45页 |
| 3.1.2 菌株、载体 | 第45页 |
| 3.1.3 酶及生化试剂 | 第45-46页 |
| 3.1.4 主要试剂及培养基的配制 | 第46页 |
| 3.1.5 试验所用 PCR 引物 | 第46页 |
| 3.1.6 主要仪器 | 第46-47页 |
| 3.2 方法 | 第47-51页 |
| 3.2.1 农杆菌侵染液的制备 | 第47-48页 |
| 3.2.2 农杆菌介导的叶盘法转基因 | 第48页 |
| 3.2.3 转基因株系的 PCR 检测 | 第48页 |
| 3.2.4 荧光定量 PCR 检测 | 第48-49页 |
| 3.2.5 ELISA 检测 BtCry1Ac 毒蛋白 | 第49页 |
| 3.2.6 ELISA 检测 BtCry3A 毒蛋白 | 第49-50页 |
| 3.2.7 抗虫试验 | 第50-51页 |
| 3.2.8 耐盐试验 | 第51页 |
| 3.3 结果与分析 | 第51-61页 |
| 3.3.1 农杆菌侵染液的制备 | 第51-52页 |
| 3.3.2 转基因植株的获得 | 第52页 |
| 3.3.3 转基因株系的 PCR 检测 | 第52-54页 |
| 3.3.4 荧光定量 PCR 检测 | 第54-57页 |
| 3.3.5 ELISA 检测 Bt 毒蛋白表达量 | 第57-58页 |
| 3.3.6 抗虫试验 | 第58-60页 |
| 3.3.7 耐盐试验 | 第60-61页 |
| 3.4 小结 | 第61-62页 |
| 4 多基因转化载体对欧美杨 107 杨的遗传转化 | 第62-75页 |
| 4.1 材料 | 第62-63页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第62页 |
| 4.1.2 菌株和载体 | 第62页 |
| 4.1.3 酶、主要试剂及培养基 | 第62页 |
| 4.1.4 主要仪器 | 第62-63页 |
| 4.1.5 试验所用引物 | 第63页 |
| 4.2 方法 | 第63-65页 |
| 4.2.1 无菌 107 杨组培苗的获得 | 第63页 |
| 4.2.2 Kan 临界浓度的确定 | 第63-64页 |
| 4.2.3 Cef 使用浓度的确定 | 第64页 |
| 4.2.4 农杆菌介导的 107 杨遗传转化 | 第64页 |
| 4.2.5 转基因植株的 DNA 提取 | 第64-65页 |
| 4.2.6 转基因植株的 PCR 检测 | 第65页 |
| 4.3 结果与分析 | 第65-74页 |
| 4.3.1 无菌组培苗的获得 | 第65-66页 |
| 4.3.2 Kan 临界浓度的确定 | 第66-67页 |
| 4.3.3 Cef 的使用浓度的确定 | 第67-69页 |
| 4.3.4 转基因 107 杨的获得 | 第69-71页 |
| 4.3.5 转基因植株的 PCR 检测 | 第71-74页 |
| 4.4 小结 | 第74-75页 |
| 5 讨论 | 第75-78页 |
| 5.1 转多基因烟草和 107 杨的获得 | 第75页 |
| 5.2 影响农杆菌介导法遗传转化的因素 | 第75-76页 |
| 5.3 Bt 毒蛋白的表达分析 | 第76-77页 |
| 5.4 转基因植物中外源基因的失活、沉默与丢失 | 第77-78页 |
| 6 结论 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-84页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第84-85页 |
| 作者简介 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
