| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 英文缩略表 | 第14-15页 |
| 第一章 引言 | 第15-24页 |
| 1.1 维生素E在植物中的合成研究进展 | 第15-18页 |
| 1.1.1 维生素E的发现和组分 | 第15-16页 |
| 1.1.2 维生素E的生物合成途径 | 第16-18页 |
| 1.2 维生素E合成途径的关键酶基因研究进展 | 第18-21页 |
| 1.2.1 4-羟苯丙酮酸双加氧酶(HPPD) | 第18-19页 |
| 1.2.2 尿黑酸植基转移酶(HPT) | 第19页 |
| 1.2.3 生育酚环化酶(TC) | 第19-20页 |
| 1.2.4 2-甲基,6-叶绿醇苯醌甲基转移酶(MPBQMT) | 第20页 |
| 1.2.5 γ-生育酚甲基转移酶(γ-TMT) | 第20-21页 |
| 1.3 维生素E的作用 | 第21-23页 |
| 1.3.1 抗氧化 | 第21-22页 |
| 1.3.2 抗逆性 | 第22页 |
| 1.3.3 信号传导 | 第22-23页 |
| 1.4 研究内容和意义 | 第23-24页 |
| 第二章 Γ-生育酚甲基转移酶基因的克隆及功能分析 | 第24-54页 |
| 2.1 材料和方法 | 第24-36页 |
| 2.1.1 材料 | 第24-25页 |
| 2.1.2 紫花苜蓿TMT序列的克隆 | 第25-27页 |
| 2.1.3 紫花苜蓿TMT基因的生物信息学分析 | 第27页 |
| 2.1.4 中苜一号不同胁迫处理 | 第27页 |
| 2.1.5 实时荧光定量PCR检测紫花苜蓿TMT基因在不同组织和处理条件下的表达特性 | 第27页 |
| 2.1.6 双元表达载体的构建 | 第27-29页 |
| 2.1.7 紫花苜蓿MsTMT-GFP融合蛋白的亚细胞定位 | 第29页 |
| 2.1.8 原生质体的制备及遗传转化 | 第29-30页 |
| 2.1.9 紫花苜蓿MsTMT转化拟南芥 | 第30-32页 |
| 2.1.10 转基因苗的初步检测 | 第32页 |
| 2.1.11 Southern杂交分析 | 第32-34页 |
| 2.1.12 MsTMT转化紫花苜蓿 | 第34-35页 |
| 2.1.13 转基因植物维生素E含量测定 | 第35页 |
| 2.1.14 种子发芽率,生物量以及过氧化物酶活性的测定 | 第35-36页 |
| 2.1.15 MsTMT基因启动子DNA序列的克隆与分析 | 第36页 |
| 2.1.16 黑暗诱导下的衰老过程研究 | 第36页 |
| 2.2 结果与分析 | 第36-52页 |
| 2.2.1 紫花苜蓿MsTMT基因的克隆 | 第36-38页 |
| 2.2.2 MsTMT基因的生物信息学分析 | 第38-40页 |
| 2.2.3 实时定量PCR分析MsTMT基因的组织特异性表达特性 | 第40-41页 |
| 2.2.4 MsTMT启动子分析及亚细胞定位 | 第41-43页 |
| 2.2.5 转基因植物的分子检测 | 第43-44页 |
| 2.2.6 MsTMT在转基因植物中的表达量 | 第44-45页 |
| 2.2.7 GUS化学组织染色分析MsTMT蛋白表达量 | 第45页 |
| 2.2.8 转基因拟南芥中内源维生素E主要合成基因的表达分析 | 第45-46页 |
| 2.2.9 转基因拟南芥叶片和种子中生育酚和生育三烯酚的含量和组分 | 第46-48页 |
| 2.2.10 转基因拟南芥抗逆评价 | 第48-49页 |
| 2.2.11 转基因紫花苜蓿的分子检测 | 第49页 |
| 2.2.12 转基因紫花苜蓿中MsTMT在转录水平和蛋白水平的表达量 | 第49-50页 |
| 2.2.13 转基因紫花苜蓿叶片中维生素E的含量 | 第50页 |
| 2.2.14 紫花苜蓿暗处理诱导的叶片衰老过程与对照相比延缓显著 | 第50-51页 |
| 2.2.15 转基因紫花苜蓿品质测定 | 第51-52页 |
| 2.3 讨论 | 第52-54页 |
| 第三章 尿黑酸植基转移酶的克隆及表达分析 | 第54-63页 |
| 3.1 实验材料和方法 | 第54-56页 |
| 3.1.1 材料 | 第54页 |
| 3.1.2 紫花苜蓿MsHPT的克隆 | 第54页 |
| 3.1.3 紫花苜蓿HPT基因的生物信息学分析 | 第54-55页 |
| 3.1.4 紫花苜蓿HPT基因启动子的克隆和分析 | 第55页 |
| 3.1.5 中苜一号的不同胁迫处理 | 第55-56页 |
| 3.1.6 实时荧光定量PCR检测紫花苜蓿MsHPT基因在不同组织和处理条件下的表达特性 | 第56页 |
| 3.1.7 双元表达载体的构建 | 第56页 |
| 3.1.8 紫花苜蓿MsTMT转化拟南芥及紫花苜蓿 | 第56页 |
| 3.1.9 转基因植株的初步鉴定 | 第56页 |
| 3.1.10 转基因材料维生素E含量和组分测定 | 第56页 |
| 3.2 结果与分析 | 第56-62页 |
| 3.2.1 紫花苜蓿HPT基因的克隆与生物信息学分析 | 第56-59页 |
| 3.2.2 紫花苜蓿MsHPT基因启动子的克隆与生物信息学分析 | 第59页 |
| 3.2.3 MsHPT基因在不同组织的表达特异性 | 第59-60页 |
| 3.2.4 不同处理条件下MsHPT基因的表达分析 | 第60-61页 |
| 3.2.5 MsHPT基因的遗传转化 | 第61页 |
| 3.2.6 转基因拟南芥MsHPT GUS染色与Southern杂交 | 第61-62页 |
| 3.3 讨论 | 第62-63页 |
| 第四章 4-羟基丙酮酸转移酶的克隆及功能分析 | 第63-81页 |
| 4.1 实验方法 | 第63-64页 |
| 4.1.1 RNA提取及cDNA的合成 | 第63页 |
| 4.1.2. 紫花苜蓿HPPD基因保守区克隆 | 第63页 |
| 4.1.3 紫花苜蓿HPPD基因3'末端和5'末端cDNA片段的克隆 | 第63页 |
| 4.1.4 紫花苜蓿HPPD启动子的克隆及分析 | 第63页 |
| 4.1.5 中苜一号的不同胁迫处理 | 第63-64页 |
| 4.1.6 双元表达载体的构建 | 第64页 |
| 4.1.7 紫花苜蓿MsHPPD转拟南芥和紫花苜蓿 | 第64页 |
| 4.1.8 转基因苗的初步鉴定 | 第64页 |
| 4.1.9 转基因植物的维生素E含量和组分的测定 | 第64页 |
| 4.2 结果与分析 | 第64-78页 |
| 4.2.1 紫花苜蓿4-羟基丙酮酸转移酶的克隆及分析 | 第64-67页 |
| 4.2.2 MsHPPD组织表达特异性 | 第67页 |
| 4.2.3 用基因特异性启动子分析MsHPPD的蛋白表达 | 第67-68页 |
| 4.2.4 不同处理条件下MsHPPD的表达分析 | 第68-70页 |
| 4.2.5 MsHPPD在转基因拟南芥中的表达量以及对拟南芥内源维生素E合成基因表达的影响 | 第70-71页 |
| 4.2.6 转基因拟南芥内源维生素E合成基因的表达分析 | 第71-72页 |
| 4.2.7 转基因拟南芥种子和叶片中生育酚和生育三烯酚的含量和组分的测定 | 第72-74页 |
| 4.2.8 非胁迫与胁迫条件下,转基因拟南芥的发芽率研究 | 第74-75页 |
| 4.2.9 转基因与非转基因拟南芥ABA含量以及MsHPPD表达量分析 | 第75-76页 |
| 4.2.10 转基因与非转基因拟南芥ABA合成和信号途径基因的表达分析 | 第76页 |
| 4.2.11 转基因紫花苜蓿中维生素E含量的测定 | 第76-77页 |
| 4.2.12 转基因紫花苜蓿品质指标的测定 | 第77-78页 |
| 4.3 讨论 | 第78-81页 |
| 第五章 全文结论 | 第81-84页 |
| 参考文献 | 第84-93页 |
| 附录 | 第93-96页 |
| 致谢 | 第96-97页 |
| 作者简历 | 第97页 |
