| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 主要符号表 | 第12-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-22页 |
| 1.1 脂肪酶的应用 | 第13-16页 |
| 1.1.1 对油和脂肪的水解作用 | 第13页 |
| 1.1.2 富含油脂污水的预处理 | 第13-14页 |
| 1.1.3 食品加工 | 第14页 |
| 1.1.4 合成精细化工原料 | 第14-15页 |
| 1.1.5 生产生物燃料和生物润滑油 | 第15页 |
| 1.1.6 生产生物降解聚合物 | 第15-16页 |
| 1.2 大肠杆菌表面展示概述 | 第16-17页 |
| 1.3 生物柴油文献综述 | 第17-20页 |
| 1.3.1 液体运输能源 | 第17-18页 |
| 1.3.2 生物柴油技术方面 | 第18-19页 |
| 1.3.3 生物柴油原料 | 第19-20页 |
| 1.3.4 生物柴油的酶催化 | 第20页 |
| 1.4 本文的研究目的及意义 | 第20-22页 |
| 第二部分 材料和方法 | 第22-33页 |
| 2.1 实验材料与仪器 | 第22-26页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第22页 |
| 2.1.2 仪器与设备 | 第22页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.4 培养基 | 第23-25页 |
| 2.1.5 实验主要溶液配制 | 第25-26页 |
| 2.1.6 引物序列 | 第26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-33页 |
| 2.2.1 PCR扩增lipA | 第26-27页 |
| 2.2.2 PCR产物检测及纯化 | 第27页 |
| 2.2.3 表达载体的构建 | 第27页 |
| 2.2.4 重组大肠杆菌的摇瓶培养 | 第27页 |
| 2.2.5 LipA脂肪酶特异性多克隆抗体的制备 | 第27-28页 |
| 2.2.6 外膜蛋白提取 | 第28页 |
| 2.2.7 蛋白质免疫印记 | 第28页 |
| 2.2.8 重组大肠杆菌脂肪酶活力定量检测 | 第28-29页 |
| 2.2.9 免疫荧光显微技术 | 第29-30页 |
| 2.2.10 流式细胞仪分析 | 第30页 |
| 2.2.11 展示脂肪酶的酶学性质 | 第30页 |
| 2.2.12 生物柴油的合成 | 第30-33页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第33-48页 |
| 3.1 表面展示载体的构建 | 第33-34页 |
| 3.2 重组质粒鉴定 | 第34页 |
| 3.3 外膜蛋白提取 | 第34-35页 |
| 3.4 免疫荧光检测 | 第35-36页 |
| 3.5 流式细胞仪分析 | 第36-37页 |
| 3.6 展示脂肪酶的酶学性质 | 第37-42页 |
| 3.6.1 对硝基标准曲线的绘制 | 第37-38页 |
| 3.6.2 脂肪酶活性测定 | 第38页 |
| 3.6.3 展示脂肪酶的最适温度 | 第38页 |
| 3.6.4 展示脂肪酶的最适PH | 第38-39页 |
| 3.6.5 展示脂肪酶底物特异性 | 第39-40页 |
| 3.6.6 表面活性剂对展示脂肪酶活性的影响 | 第40页 |
| 3.6.7 金属离子对展示脂肪酶活性的影响 | 第40-41页 |
| 3.6.8 有机溶剂对展示脂肪酶活性的影响 | 第41-42页 |
| 3.7 生物柴油的合成 | 第42-48页 |
| 3.7.1 脂肪酸甲酯的合成 | 第42-43页 |
| 3.7.2 脂肪酸乙酯的合成 | 第43-44页 |
| 3.7.3 以大豆油为底物合成生物柴油 | 第44-45页 |
| 3.7.4 放大脂肪酸甲酯合成反应体系10、100倍 | 第45-46页 |
| 3.7.5 放大脂肪酸甲酯合成反应体系1000倍 | 第46页 |
| 3.7.6 气相色谱定量分析 | 第46-48页 |
| 第四部分 讨论与展望 | 第48-50页 |
| 4.1 讨论 | 第48-49页 |
| 4.1.1 脂肪酶在大肠杆菌中的表面展示 | 第48页 |
| 4.1.2 展示脂肪酶的特性 | 第48页 |
| 4.1.3 生物柴油的合成 | 第48-49页 |
| 4.2 展望 | 第49-50页 |
| 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-58页 |
| 致谢 | 第58页 |