| 中文摘要 | 第3-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 第一章 前言 | 第13-19页 |
| 一、研究背景及国内外发展趋势 | 第13-16页 |
| 1.1 胚胎干细胞的概述 | 第13-14页 |
| 1.2 Tfcp211在胚胎干细胞中的研究进展 | 第14-16页 |
| 1.3 可能与Tfcp211促进mESCs自我更新的有关基因的选取 | 第16页 |
| 二、研究目的、意义及拟解决的关键科学问题 | 第16-17页 |
| 三、采用主要研究方法的简述 | 第17-19页 |
| 3.1 mESCs的培养 | 第17页 |
| 3.2 过表达载体的构建 | 第17-18页 |
| 3.3 病毒系统的构建和感染 | 第18页 |
| 3.4 蛋白质免疫共沉淀 | 第18-19页 |
| 第二章 实验材料 | 第19-22页 |
| 一、实验细胞 | 第19页 |
| 二、实验材料 | 第19-20页 |
| 2.1 过表达载体质粒PiggyBac质粒 | 第19-20页 |
| 2.2 慢病毒包装pLKO.1质粒 | 第20页 |
| 2.3 慢病毒包装细胞株293FT | 第20页 |
| 2.4 转化所用的大肠杆菌菌株DH5 α | 第20页 |
| 三、实验仪器 | 第20-21页 |
| 四、实验试剂 | 第21-22页 |
| 第三章 实验方法 | 第22-45页 |
| 一、46C mESCs的培养 | 第22-24页 |
| 1.1 46C mESCs培养基的配置 | 第22页 |
| 1.2 46C mESCs的复苏 | 第22-23页 |
| 1.3 46C mESCs的冻存 | 第23页 |
| 1.4 明胶(Gelatin)的包被 | 第23页 |
| 1.5 46C mESCs的传代 | 第23-24页 |
| 二、Tfcp211在46C mESCs中的过表达 | 第24-34页 |
| 2.1 PB-Tfcp211载体的构建 | 第24-29页 |
| 2.2 PB-Tfcp211重组质粒转染46C mEsCs | 第29-30页 |
| 2.3 检测46C mESCs中Tfcp211的过表达 | 第30-34页 |
| 三、过表达Tfcp21146C mESCs单克隆细胞株的建立 | 第34-35页 |
| 3.1 使用上述过表达Tfcp211 46C mESCs进行单克隆培养 | 第34页 |
| 3.2 AP染色选取单克隆细胞株 | 第34页 |
| 3.3 qRT-PCR检测单克隆中Tfcp211的表达量 | 第34-35页 |
| 四、RNA干扰下调mESCs中MTA成员的表达 | 第35-42页 |
| 4.1 shRNA干扰基因的选取 | 第35页 |
| 4.2 shRNA干扰序列的设计和合成 | 第35-37页 |
| 4.3 重组质粒Plko.1-shRNA的构建及鉴定 | 第37-38页 |
| 4.4 重组质粒Plko.1转化DH5 α感受态细胞 | 第38页 |
| 4.5 测序鉴定阳性克隆 | 第38-39页 |
| 4.6 病毒的包装与感染 | 第39-40页 |
| 4.7 RNA干扰检测 | 第40-42页 |
| 五、免疫共沉淀(co-IP)鉴定MTA1与Tfcp211的相互作用 | 第42-45页 |
| 5.1 PB-flag与PB-flag-Tfcp211载体的构建 | 第42-43页 |
| 5.2 PB-HA-Mta1载体的构建 | 第43页 |
| 5.3 PB-flag与PB-HA-Mta1重组载体共转染46C mESCs | 第43页 |
| 5.4 PB-flag-TFcp21与PB-HA-Mta1重组载体共转染46C mEsCs | 第43页 |
| 5.5 WesternBlot检测Mta1与Tfcp211的过表达情况 | 第43页 |
| 5.6 免疫共沉淀(co-IP) | 第43-44页 |
| 5.7 WesternBlot检测MTA1与Tfcp211间的相互作用 | 第44-45页 |
| 第四章 结果与讨论 | 第45-61页 |
| 一、46C mESCs的培养 | 第45页 |
| 二、46C mESCs中Tfcp211的过表达鉴定 | 第45-47页 |
| 2.1 WesternBlot检测46C mESCs中Tfcp211的过表达 | 第46页 |
| 2.2 Tfcp211促进46C mESCs的自我更新 | 第46-47页 |
| 三、鉴定PB-Tfcp21146C mESCs单克隆的过表达 | 第47-48页 |
| 3.1 AP染色选取46C mESCs单克隆细胞株 | 第47-48页 |
| 3.2 qRT-PCR检测46C mESCs单克隆IB-3中Tfcp211的表达量 | 第48页 |
| 四、mESCs中干扰MTA的结果 | 第48-58页 |
| 4.1 重组质粒Plko.1的测序结果 | 第48-55页 |
| 4.2 AP染色检测干扰MTA结果 | 第55-56页 |
| 4.3 qRT-PCR检测干扰Mta1 mESCs相关基因的表达量 | 第56-57页 |
| 4.4 细胞免疫荧光鉴定 | 第57-58页 |
| 五、免疫共沉淀(co-IP)鉴定MTAl与Tfcp211的相互作用 | 第58-61页 |
| 5.1 WesternBlot检测Mta1与Tfcp211的过表达情况 | 第59页 |
| 5.2 免疫共沉淀检测MTA1与Tfcp211间的相互作用 | 第59-61页 |
| 第五章 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
