| 致谢 | 第6-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略词和术语表 | 第19-21页 |
| 第一章 绪论 | 第21-33页 |
| 1.1 研究背景 | 第21-30页 |
| 1.1.1 miRNA的产生及其功能 | 第21-22页 |
| 1.1.2 miR-489的研究现状 | 第22-23页 |
| 1.1.3 p38α的研究现状 | 第23-25页 |
| 1.1.4 自噬概述 | 第25-29页 |
| 1.1.5 肿瘤干细胞概述 | 第29-30页 |
| 1.2 展望 | 第30-31页 |
| 1.3 研究目的、方法、意义 | 第31-33页 |
| 第二章 人miR-489能够在癌细胞中诱导细胞自噬 | 第33-53页 |
| 2.1 引言 | 第33-34页 |
| 2.2 材料 | 第34-36页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第34-35页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第35页 |
| 2.2.3 主要仪器 | 第35-36页 |
| 2.3 实验方法 | 第36-45页 |
| 2.3.1 细胞培养及病毒转染 | 第36-38页 |
| 2.3.2 小RNA抽提 | 第38-39页 |
| 2.3.3 cDNA的合成 | 第39页 |
| 2.3.4 miR-489的RT-PCR检测 | 第39-40页 |
| 2.3.5 总蛋白抽提 | 第40-41页 |
| 2.3.6 Western blotting | 第41-42页 |
| 2.3.7 细胞免疫荧光 | 第42-44页 |
| 2.3.8 miRNA靶基因预测方法 | 第44页 |
| 2.3.9 双荧光素酶报告系统 | 第44-45页 |
| 2.4 实验结果 | 第45-51页 |
| 2.4.1 人纤维肉瘤HT1080细胞中miR-489的过表达 | 第45-46页 |
| 2.4.2 人纤维肉瘤HT1080细胞中miR-489转染后导致自噬上升 | 第46-47页 |
| 2.4.3 在人纤维肉瘤细胞HT1080中miR-489调控AMPK/mTOR非依赖的自噬 | 第47-48页 |
| 2.4.4 人miR-489与p38α存在结合活性 | 第48-50页 |
| 2.4.5 人纤维肉瘤HT1080细胞中miR-489靶向p38α | 第50-51页 |
| 2.5 小结与讨论 | 第51-53页 |
| 第三章 人miR-489调控自噬的信号通路分析 | 第53-66页 |
| 3.1 引言 | 第53-55页 |
| 3.2 材料 | 第55-56页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第55页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第55-56页 |
| 3.2.3 主要仪器 | 第56页 |
| 3.3 方法 | 第56页 |
| 3.3.1 细胞培养及病毒转染 | 第56页 |
| 3.3.2 总蛋白抽提取 | 第56页 |
| 3.3.3 Western blotting | 第56页 |
| 3.3.4 细胞免疫荧光 | 第56页 |
| 3.4 结果 | 第56-63页 |
| 3.4.1 人纤维肉瘤HT1080细胞中miR-489影响DEK和p53蛋白 | 第56-57页 |
| 3.4.2 人纤维肉瘤HT1080细胞中p38α调控细胞自噬的途径 | 第57-61页 |
| 3.4.3 人纤维肉瘤HT1080细胞中DEK调控细胞自噬的途径 | 第61-63页 |
| 3.5 小结与讨论 | 第63-66页 |
| 第四章 在胃癌干细胞中,人miR-489对自噬的调控 | 第66-83页 |
| 4.1 引言 | 第66-67页 |
| 4.2 材料 | 第67-68页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第67-68页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第68页 |
| 4.2.3 主要仪器 | 第68页 |
| 4.3 实验方法 | 第68-73页 |
| 4.3.1 胃癌干细胞分选 | 第68-69页 |
| 4.3.2 肿瘤球的无血清培养 | 第69-70页 |
| 4.3.3 肿瘤球的传代 | 第70页 |
| 4.3.4 细胞培养及病毒转染 | 第70页 |
| 4.3.5 总蛋白抽提取 | 第70-71页 |
| 4.3.6 Western blotting | 第71页 |
| 4.3.7 细胞免疫荧光 | 第71页 |
| 4.3.8 基质胶三维培养 | 第71页 |
| 4.3.9 石蜡切片 | 第71-73页 |
| 4.3.10 苏木精伊红染色 | 第73页 |
| 4.4 结果 | 第73-81页 |
| 4.4.1 胃癌干细胞的分选 | 第73-74页 |
| 4.4.2 肿瘤干细胞的干性验证 | 第74-77页 |
| 4.4.3 胃癌干细胞中miR-489调控p38α导致自噬升高 | 第77-80页 |
| 4.4.4 转染miR-489后胃癌干细胞的成球率下降 | 第80-81页 |
| 4.5 小结与讨论 | 第81-83页 |
| 第五章 胃癌干细胞的静息和自噬特征分析 | 第83-94页 |
| 5.1 引言 | 第83-84页 |
| 5.2 材料 | 第84-85页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第84页 |
| 5.2.2 主要试剂 | 第84页 |
| 5.2.3 主要仪器 | 第84-85页 |
| 5.3 实验方法 | 第85-86页 |
| 5.3.1 PKH26染色 | 第85页 |
| 5.3.2 石蜡切片 | 第85页 |
| 5.3.3 石蜡切片的免疫荧光检测 | 第85-86页 |
| 5.4 结果 | 第86-92页 |
| 5.4.1 静息胃癌干细胞的标记和鉴定 | 第86-88页 |
| 5.4.2 静息胃癌干细胞的自噬特征分析 | 第88-90页 |
| 5.4.3 静息胃癌干细胞不响应AMPK/mTOR信号通路 | 第90-92页 |
| 5.5 小结与讨论 | 第92-94页 |
| 第六章 结论与展望 | 第94-95页 |
| 6.1 结论 | 第94页 |
| 6.2 展望 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-110页 |
| 附录1 常用试剂配制一览表 | 第110-115页 |
| 附录2 常用分子生物学方法 | 第115-120页 |
| 附录3 引物列表 | 第120-121页 |
| 附录4 人miR-489的靶基因预测 | 第121-128页 |
| 作者简历 | 第128页 |
