| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 前言 | 第12-27页 |
| 1.1 海洋放线菌 | 第12-14页 |
| 1.2 海洋放线菌产生的次级代谢产物 | 第14-16页 |
| 1.2.1 生物碱 | 第14页 |
| 1.2.2 萜类 | 第14页 |
| 1.2.3 大环内酯类 | 第14-15页 |
| 1.2.4 环肽 | 第15页 |
| 1.2.5 醌类 | 第15-16页 |
| 1.3 海洋放线菌非核糖体肽合成酶生物合成途径研究进展 | 第16-19页 |
| 1.3.1 非核糖体肽(NRPS)合成酶以及合成途径 | 第16-18页 |
| 1.3.2 海洋放线菌NRPS生物合成途径的研究 | 第18-19页 |
| 1.4 放线菌基因组以及基因组采掘 | 第19-21页 |
| 1.4.1 放线菌基因组 | 第19页 |
| 1.4.2 放线菌基因组采掘 | 第19-21页 |
| 1.4.3 海洋放线菌基因采掘 | 第21页 |
| 1.5 促使放线菌基因簇表达的方法 | 第21-25页 |
| 1.5.1 优化培养条件 | 第22页 |
| 1.5.2 操作转录调节基因 | 第22-23页 |
| 1.5.3 基因敲除 | 第23-24页 |
| 1.5.4 异源表达 | 第24-25页 |
| 1.6 本文研究的目的和意义 | 第25-27页 |
| 第二章 材料和方法 | 第27-46页 |
| 2.1 实验材料 | 第27-34页 |
| 2.1.1 实验菌株 | 第27页 |
| 2.1.2 实验质粒和载体 | 第27-28页 |
| 2.1.3 实验引物 | 第28页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第28-29页 |
| 2.1.5 实验试剂 | 第29-31页 |
| 2.1.6 培养基与抗生素 | 第31-32页 |
| 2.1.7 实验所用的抗生素 | 第32页 |
| 2.1.8 缓冲液 | 第32-34页 |
| 2.2 实验方法 | 第34-46页 |
| 2.2.1 菌种保藏 | 第34页 |
| 2.2.2 大肠杆菌质粒的快速提取 | 第34页 |
| 2.2.3 碱裂解法质粒提取 | 第34-35页 |
| 2.2.4 酸酚法提质粒 | 第35-36页 |
| 2.2.5 琼脂糖凝胶电泳 | 第36页 |
| 2.2.6 总DNA提取 | 第36-37页 |
| 2.2.7 PCR片段酚抽浓缩 | 第37页 |
| 2.2.8 胶回收(试剂盒) | 第37-38页 |
| 2.2.9 接合转移 | 第38-39页 |
| 2.2.10 感受态的制备、电转 | 第39页 |
| 2.2.11 酶切、链接反应 | 第39-40页 |
| 2.2.12 目的基因扩增 | 第40-41页 |
| 2.2.13 基因组文库的筛选 | 第41页 |
| 2.2.14 菌株活化 | 第41页 |
| 2.2.15 菌体发酵培养 | 第41-42页 |
| 2.2.16 发酵液处理 | 第42页 |
| 2.2.17 发酵液样品HPLC条件 | 第42-43页 |
| 2.2.18 发酵样品分离纯化条件 | 第43页 |
| 2.2.19 样品TLC分析 | 第43页 |
| 2.2.20 发酵浸膏样品液液萃取 | 第43-44页 |
| 2.2.21 样品正相硅胶柱分离纯化(干法上样) | 第44页 |
| 2.2.22 样品开放柱柱分离纯化(湿法上样) | 第44-45页 |
| 2.2.23 多重耐药菌抑菌实验 | 第45页 |
| 2.2.24 序列分析网站 | 第45页 |
| 2.2.25 其他 | 第45-46页 |
| 第三章 深海链霉菌S. somaliensis SCSIO ZH66中nrps-3生物合成基因簇的研究 | 第46-62页 |
| 3.1 引言 | 第46页 |
| 3.2 实验结果 | 第46-61页 |
| 3.2.1 S.somaliensis SCSIO ZH66中nrps-3基因簇的生物信息学分析 | 第46-49页 |
| 3.2.2 突变株Δorf8发酵产物的HPLC分析 | 第49页 |
| 3.2.3 突变株Δorf8的大规模发酵 | 第49-50页 |
| 3.2.4 突变株Δorf8发酵产物的分离纯化 | 第50-53页 |
| 3.2.5 化合物的结构鉴定 | 第53-60页 |
| 3.2.6 化合物violapyrone B的MDR菌抑制活性实验 | 第60-61页 |
| 3.3 本章小结 | 第61-62页 |
| 第四章 多效调控基因regP12在链霉菌S somaliensis SCSIO ZH66中异源表达研究 | 第62-68页 |
| 4.2 引言 | 第62-66页 |
| 4.2.1 Streptomyces sp.OUC6819中regP12基因生物信息学分析 | 第62-63页 |
| 4.2.2 重组质粒的构建 | 第63-64页 |
| 4.2.3 重组菌株的构建 | 第64-65页 |
| 4.2.4 重组菌株发酵样品HPLC分析 | 第65页 |
| 4.2.5 重组菌株差异峰的初步研究 | 第65-66页 |
| 4.3 本章小结 | 第66-68页 |
| 第五章 结语与展望 | 第68-70页 |
| 5.1 结语 | 第68-69页 |
| 5.2 未来工作展望 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 符号简写 | 第75-77页 |
| 个人简历 | 第77页 |
