| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第13-40页 |
| 1.1 脂肪酶 | 第13-27页 |
| 1.1.1 脂肪酶结构基础及催化机理 | 第13-18页 |
| 1.1.2 脂肪酶的催化性质与应用 | 第18-27页 |
| 1.2 脂肪酶的分子改造 | 第27-31页 |
| 1.2.1 蛋白质理性设计 | 第28页 |
| 1.2.2 定向进化 | 第28-29页 |
| 1.2.3 蛋白质工程改造脂肪酶的应用 | 第29-31页 |
| 1.3 过氧化反应 | 第31-37页 |
| 1.3.1 酶催化过氧化反应的分子机制 | 第32-33页 |
| 1.3.2 酶催化过氧化反应的应用 | 第33-37页 |
| 1.4 本论文的研究背景、意义和内容 | 第37-40页 |
| 1.4.1 研究背景和意义 | 第37-39页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第39-40页 |
| 第二章 脂肪酶的制备及性质研究 | 第40-60页 |
| 2.1 引言 | 第40-41页 |
| 2.2 实验材料和仪器 | 第41-45页 |
| 2.2.1 基因 | 第41页 |
| 2.2.2 菌株与载体 | 第41页 |
| 2.2.3 试剂及耗材 | 第41-42页 |
| 2.2.4 实验仪器 | 第42-43页 |
| 2.2.5 培养基及缓冲液配置 | 第43-45页 |
| 2.3 实验方法 | 第45-52页 |
| 2.3.1 突变位点的选取 | 第45页 |
| 2.3.2 引物设计 | 第45页 |
| 2.3.3 脂肪酶突变体重组质粒的构建 | 第45-47页 |
| 2.3.4 脂肪酶突变体重组质粒的线性化 | 第47-48页 |
| 2.3.5 突变体重组质粒转到毕赤酵母X-33 感受态细胞 | 第48页 |
| 2.3.6 突变体重组表达菌株的筛选与鉴定 | 第48-49页 |
| 2.3.7 脂肪酶的表达与纯化 | 第49-50页 |
| 2.3.8 蛋白质浓度的测定 | 第50页 |
| 2.3.9 脂肪酶水解和酯化活力的测定 | 第50页 |
| 2.3.10 脂肪酶SMG1水解磷脂的测定 | 第50页 |
| 2.3.11 反应底物和产物的分析方法 | 第50-51页 |
| 2.3.12 同源建模构建脂肪酶SMG1的开放结构 | 第51-52页 |
| 2.3.13 脂肪酶SMG1与磷脂底物类似物的分子对接 | 第52页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第52-59页 |
| 2.4.1 脂肪酶突变体的引物序列 | 第52页 |
| 2.4.2 脂肪酶的表达与纯化 | 第52-53页 |
| 2.4.3 脂肪酶催化甘油酯的水解反应和酯化反应 | 第53-55页 |
| 2.4.4 脂肪酶SMG1对磷脂底物的水解 | 第55-56页 |
| 2.4.5 脂肪酶SMG1水解磷脂底物的分子机制 | 第56-59页 |
| 2.5 本章小结 | 第59-60页 |
| 第三章 脂肪酶催化环氧反应机制初探 | 第60-72页 |
| 3.1 引言 | 第60-61页 |
| 3.2 材料和仪器 | 第61页 |
| 3.2.1 主要试剂与材料 | 第61页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第61页 |
| 3.3 实验方法 | 第61-64页 |
| 3.3.1 脂肪酶SMG1催化油酸的环氧化反应 | 第61-62页 |
| 3.3.2 脂肪酸SMG1催化烯烃的环氧化反应 | 第62页 |
| 3.3.3 环氧化反应底物与产物的分析方法 | 第62-63页 |
| 3.3.4 色谱定量标准曲线的制备 | 第63页 |
| 3.3.5 不同碳链脂肪酸对环氧化反应的影响 | 第63页 |
| 3.3.6 脂肪酶SMG1过氧化活力的稳态动力学参数测定 | 第63-64页 |
| 3.3.7 分子动力学模拟 | 第64页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第64-71页 |
| 3.4.1 油酸和 9,10-环氧硬脂酸的标准曲线 | 第64-65页 |
| 3.4.2 1-十八烯和 1,2-环氧十八烯的标准曲线 | 第65页 |
| 3.4.3 脂肪酶SMG1及其突变体催化环氧化反应 | 第65-68页 |
| 3.4.4 脂肪酶SMG1及其突变体过氧化活力的动力学参数 | 第68-69页 |
| 3.4.5 不同碳链羧酸供体对环氧化反应效果的影响 | 第69页 |
| 3.4.6 脂肪酶SMG1催化环氧化反应的机制 | 第69-71页 |
| 3.5 本章小结 | 第71-72页 |
| 第四章 低共熔溶剂中脂肪酶催化BV氧化反应的研究 | 第72-91页 |
| 4.1 引言 | 第72-73页 |
| 4.2 材料与仪器 | 第73-74页 |
| 4.2.1 主要材料和试剂 | 第73-74页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第74页 |
| 4.3 实验方法 | 第74-77页 |
| 4.3.1 低共熔溶剂的制备 | 第74-75页 |
| 4.3.2 低共熔溶剂物理性质的测定 | 第75页 |
| 4.3.3 脂肪酶催化BV氧化反应体系的筛选 | 第75页 |
| 4.3.4 脂肪酶CalB-wt和Ser105Ala水解和过氧化酶活力的测定 | 第75-76页 |
| 4.3.5 脂肪酶CalB催化环己酮的BV氧化反应 | 第76页 |
| 4.3.6 脂肪酶CalB催化 ε-己内酯的水解反应 | 第76页 |
| 4.3.7 低共熔溶剂对BV氧化反应的影响 | 第76页 |
| 4.3.8 油/低共熔溶剂混合物的性质分析 | 第76-77页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第77-89页 |
| 4.4.1 低共熔溶剂的物理性质 | 第77-78页 |
| 4.4.2 脂肪酶催化BV氧化反应体系的筛选 | 第78-80页 |
| 4.4.3 脂肪酶CalB野生型及突变体水解和过氧化酶活力的比较 | 第80页 |
| 4.4.4 脂肪酶CalB催化环己酮的BV氧化反应 | 第80-81页 |
| 4.4.5 ε-己内酯在水/正己烷两相体系中的稳定性评价 | 第81-82页 |
| 4.4.6 低共熔溶剂对BV氧化反应的影响 | 第82-83页 |
| 4.4.7 脂肪酶CalB催化酮类底物的BV氧化反应 | 第83-85页 |
| 4.4.8 脂肪酶在DESs中催化效率提升的原因初探 | 第85-89页 |
| 4.5 本章小结 | 第89-91页 |
| 结论与展望 | 第91-93页 |
| 参考文献 | 第93-107页 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 | 第107-109页 |
| 致谢 | 第109-111页 |
| 附件 | 第111页 |
