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结核分枝杆菌氧化感应子ILFT的功能研究

中文摘要第7-8页
Abstract第8页
缩略语表第9-10页
1. 前言第10-25页
    1.1. 氧化压力胁迫第10-12页
        1.1.1. 活性氧类第10页
        1.1.2. ROS的来源第10-11页
        1.1.3. 氧化压力对细胞的损伤第11-12页
    1.2. 细胞氧化还原系统第12-15页
        1.2.1. 谷胱甘肽氧化还原系统第12-13页
        1.2.2. 硫氧还蛋白氧化还原系统第13-14页
        1.2.3. 吡啶核苷酸氧化还原系统第14-15页
    1.3. 涉及氧化压力的转录调控第15-20页
        1.3.1. OxyR:一个ROS和RNS感应子第15-17页
        1.3.2. Fur家族金属依赖的过氧化物感应子PerR第17-18页
        1.3.3. 有机氢过氧化物感应子OhrR第18-19页
        1.3.4. 其它类型调控因子第19-20页
    1.4. 结核分枝杆菌氧化胁迫的研究进展第20-23页
        1.4.1. 结核分枝杆菌的抗氧化方式第20-22页
        1.4.2. 结核分枝杆菌的氧化感应子第22-23页
    1.5. 本研究的目的、意义和思路第23-25页
        1.5.1. 本研究的目的与意义第23-24页
        1.5.2. 研究思路第24-25页
2. 材料与方法第25-36页
    2.1. 材料第25-29页
        2.1.1. 供试菌株和质粒第25-27页
        2.1.2. 培养基第27页
        2.1.3. 抗生素第27页
        2.1.4. 引物第27-28页
        2.1.5. 酶和试剂盒第28页
        2.1.6. 其它相关试剂第28-29页
    2.2. 实验方法第29-36页
        2.2.1. 分子生物学基本操作第29页
        2.2.2. 蛋白质的诱导表达、纯化和检测第29-30页
        2.2.3. 凝胶迁移率实验第30-31页
        2.2.4. DNase I足迹实验第31-32页
        2.2.5. 细菌单杂交第32-33页
        2.2.6. β-半乳糖苷酶活性测定第33页
        2.2.7. 实时定量PCR (qRT-PCR)第33-35页
        2.2.8. 生长曲线的测定第35-36页
3. 结果与分析第36-53页
    3.1. IlfT的基因图谱及同源性分析第36-38页
        3.1.1. IlfT同源性分析第36-38页
        3.1.2. ilfT的基因图谱第38页
    3.2. IlfT特异性地与ilap的相互作用第38-43页
        3.2.1. 单杂交验证IlfT与ilap的相互作用第38-39页
        3.2.2. β-半乳糖苷酶活性实验检测IlfT对靶启动子的调控作用第39-40页
        3.2.3. ilfT的克隆、表达和蛋白纯化第40-41页
        3.2.4. EMSA验证IlfT与ila的启动子的相互作用第41-42页
        3.2.5. IlfT与ila启动子的相互作用存在特异性第42-43页
    3.3. IlfT识别一个11 bp的正向重复DNA结构第43-46页
        3.3.1. EMSA实验鉴定IlfT与ilap的结合区域第43-44页
        3.3.2. DNA足迹法发现IlfT结合一个11bp的正向重复DNA结构第44-46页
    3.4. IlfT是一个氧化感应子第46-50页
        3.4.1. H_2O_2抑制IlfT的DNA结合活性第46-47页
        3.4.2. IlfT及其突变体DNA结合活性的比较第47-48页
        3.4.3. IlfT感应H_2O_2的关键氨基酸残基是Cys42和Cys167第48-49页
        3.4.4. 紫外交联检测H_2O_2对IlfT结构的影响第49-50页
    3.5. H_2O_2抑制ilfT及其靶基因的表达第50-51页
    3.6. 在结核分枝杆菌中超表达达ilfT增强细菌对氧化压力的抗性第51-53页
4. 总结和讨论第53-56页
    4.1. 总结第53页
    4.2. 讨论第53-56页
参考文献第56-66页
致谢第66页

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