中文摘要 | 第7-8页 |
Abstract | 第8页 |
缩略语表 | 第9-10页 |
1. 前言 | 第10-25页 |
1.1. 氧化压力胁迫 | 第10-12页 |
1.1.1. 活性氧类 | 第10页 |
1.1.2. ROS的来源 | 第10-11页 |
1.1.3. 氧化压力对细胞的损伤 | 第11-12页 |
1.2. 细胞氧化还原系统 | 第12-15页 |
1.2.1. 谷胱甘肽氧化还原系统 | 第12-13页 |
1.2.2. 硫氧还蛋白氧化还原系统 | 第13-14页 |
1.2.3. 吡啶核苷酸氧化还原系统 | 第14-15页 |
1.3. 涉及氧化压力的转录调控 | 第15-20页 |
1.3.1. OxyR:一个ROS和RNS感应子 | 第15-17页 |
1.3.2. Fur家族金属依赖的过氧化物感应子PerR | 第17-18页 |
1.3.3. 有机氢过氧化物感应子OhrR | 第18-19页 |
1.3.4. 其它类型调控因子 | 第19-20页 |
1.4. 结核分枝杆菌氧化胁迫的研究进展 | 第20-23页 |
1.4.1. 结核分枝杆菌的抗氧化方式 | 第20-22页 |
1.4.2. 结核分枝杆菌的氧化感应子 | 第22-23页 |
1.5. 本研究的目的、意义和思路 | 第23-25页 |
1.5.1. 本研究的目的与意义 | 第23-24页 |
1.5.2. 研究思路 | 第24-25页 |
2. 材料与方法 | 第25-36页 |
2.1. 材料 | 第25-29页 |
2.1.1. 供试菌株和质粒 | 第25-27页 |
2.1.2. 培养基 | 第27页 |
2.1.3. 抗生素 | 第27页 |
2.1.4. 引物 | 第27-28页 |
2.1.5. 酶和试剂盒 | 第28页 |
2.1.6. 其它相关试剂 | 第28-29页 |
2.2. 实验方法 | 第29-36页 |
2.2.1. 分子生物学基本操作 | 第29页 |
2.2.2. 蛋白质的诱导表达、纯化和检测 | 第29-30页 |
2.2.3. 凝胶迁移率实验 | 第30-31页 |
2.2.4. DNase I足迹实验 | 第31-32页 |
2.2.5. 细菌单杂交 | 第32-33页 |
2.2.6. β-半乳糖苷酶活性测定 | 第33页 |
2.2.7. 实时定量PCR (qRT-PCR) | 第33-35页 |
2.2.8. 生长曲线的测定 | 第35-36页 |
3. 结果与分析 | 第36-53页 |
3.1. IlfT的基因图谱及同源性分析 | 第36-38页 |
3.1.1. IlfT同源性分析 | 第36-38页 |
3.1.2. ilfT的基因图谱 | 第38页 |
3.2. IlfT特异性地与ilap的相互作用 | 第38-43页 |
3.2.1. 单杂交验证IlfT与ilap的相互作用 | 第38-39页 |
3.2.2. β-半乳糖苷酶活性实验检测IlfT对靶启动子的调控作用 | 第39-40页 |
3.2.3. ilfT的克隆、表达和蛋白纯化 | 第40-41页 |
3.2.4. EMSA验证IlfT与ila的启动子的相互作用 | 第41-42页 |
3.2.5. IlfT与ila启动子的相互作用存在特异性 | 第42-43页 |
3.3. IlfT识别一个11 bp的正向重复DNA结构 | 第43-46页 |
3.3.1. EMSA实验鉴定IlfT与ilap的结合区域 | 第43-44页 |
3.3.2. DNA足迹法发现IlfT结合一个11bp的正向重复DNA结构 | 第44-46页 |
3.4. IlfT是一个氧化感应子 | 第46-50页 |
3.4.1. H_2O_2抑制IlfT的DNA结合活性 | 第46-47页 |
3.4.2. IlfT及其突变体DNA结合活性的比较 | 第47-48页 |
3.4.3. IlfT感应H_2O_2的关键氨基酸残基是Cys42和Cys167 | 第48-49页 |
3.4.4. 紫外交联检测H_2O_2对IlfT结构的影响 | 第49-50页 |
3.5. H_2O_2抑制ilfT及其靶基因的表达 | 第50-51页 |
3.6. 在结核分枝杆菌中超表达达ilfT增强细菌对氧化压力的抗性 | 第51-53页 |
4. 总结和讨论 | 第53-56页 |
4.1. 总结 | 第53页 |
4.2. 讨论 | 第53-56页 |
参考文献 | 第56-66页 |
致谢 | 第66页 |