| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第12-23页 |
| 1.1 茯苓萜类物质研究进展 | 第12-15页 |
| 1.1.1 茯苓概述 | 第12-13页 |
| 1.1.2 茯苓的药理作用概述 | 第13页 |
| 1.1.3 茯苓的化学成分 | 第13-14页 |
| 1.1.4 茯苓萜类生物合成研究进展 | 第14-15页 |
| 1.2 磷酸甲羟戊酸激酶研究进展 | 第15-22页 |
| 1.2.1 萜类物质概述 | 第15-16页 |
| 1.2.2 萜类骨架生物合成代谢 | 第16-18页 |
| 1.2.3 磷酸甲羟戊酸激酶的生化功能 | 第18-21页 |
| 1.2.4 磷酸甲羟戊酸激酶在萜类代谢中的调控作用 | 第21-22页 |
| 1.3 研究意义与技术路线 | 第22-23页 |
| 1.3.1 研究意义 | 第22页 |
| 1.3.2 本研究的技术路线 | 第22-23页 |
| 2 茯苓磷酸甲羟戊酸激酶基因（PcPMK）的克隆及序列分析 | 第23-43页 |
| 2.1 材料与方法 | 第23-30页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第23页 |
| 2.1.2 菌株和载体 | 第23-24页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第24页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第24页 |
| 2.1.5 核酸提取 | 第24-25页 |
| 2.1.6 第一链cDNA合成 | 第25-26页 |
| 2.1.7 PcPMK基因片段获取 | 第26页 |
| 2.1.8 3’ RACE | 第26-27页 |
| 2.1.9 5’ RACE | 第27-28页 |
| 2.1.10 PcPMK基因全长扩增 | 第28-29页 |
| 2.1.11 PcPMK基因组DNA序列获得 | 第29页 |
| 2.1.12 PcPMK基因生物信息学分析 | 第29-30页 |
| 2.2 结果与分析 | 第30-40页 |
| 2.2.1 PcPMK基因的分子克隆 | 第30-32页 |
| 2.2.2 PcPMK基因结构与启动子分析 | 第32-33页 |
| 2.2.3 PcPMK蛋白质系统发育分析 | 第33-36页 |
| 2.2.4 PcPMK蛋白质理化性质预测分析 | 第36-37页 |
| 2.2.5 PcPMK蛋白质 3D结构模拟与功能分析 | 第37-40页 |
| 2.3 小结与讨论 | 第40-43页 |
| 2.3.1 小结 | 第40页 |
| 2.3.2 讨论 | 第40-43页 |
| 3 茯苓PcPMK基因的酵母功能互补 | 第43-53页 |
| 3.1 材料与方法 | 第44-48页 |
| 3.1.1 菌株和载体 | 第44页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第44页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第44页 |
| 3.1.4 酵母表达载体的构建及酵母转化 | 第44-46页 |
| 3.1.5 酵母产孢培养及四分体单孢分离 | 第46-47页 |
| 3.1.6 PcPMK基因功能互补展示 | 第47-48页 |
| 3.2 结果与分析 | 第48-51页 |
| 3.2.1 酵母表达载体的构建 | 第48-49页 |
| 3.2.2 酵母单倍体菌株分离 | 第49-51页 |
| 3.2.3 PcPMK基因酵母功能互补 | 第51页 |
| 3.3 小结与讨论 | 第51-53页 |
| 3.3.1 小结 | 第51-52页 |
| 3.3.2 讨论 | 第52-53页 |
| 4 茯苓磷酸甲羟戊酸激酶体外酶活验证及酶动力学研究 | 第53-68页 |
| 4.1 材料与方法 | 第54-58页 |
| 4.1.1 菌株和载体 | 第54页 |
| 4.1.2 主要试剂、耗材 | 第54页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第54-55页 |
| 4.1.4 原核表达载体的构建 | 第55-56页 |
| 4.1.5 PcPMK蛋白表达及纯化 | 第56-57页 |
| 4.1.6 PcPMK功能的体外酶促反应验证 | 第57-58页 |
| 4.1.7 PcPMK的酶动力学研究 | 第58页 |
| 4.2 结果与分析 | 第58-65页 |
| 4.2.1 PcPMK蛋白表达与纯化 | 第58-60页 |
| 4.2.2 重组PcPMK的体外活性 | 第60-61页 |
| 4.2.3 不同Mn2+和Mg2+浓度对PcPMK酶活力的影响 | 第61-62页 |
| 4.2.4 PcPMK酶动力常数 | 第62-65页 |
| 4.3 小结与讨论 | 第65-68页 |
| 4.3.1 小结 | 第65页 |
| 4.3.2 讨论 | 第65-68页 |
| 5 结论和展望 | 第68-70页 |
| 5.1 结论 | 第68页 |
| 5.2 展望 | 第68-69页 |
| 5.3 本文创新点 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-79页 |
| 附录 | 第79-89页 |
| 附录1 本研究中使用的引物序列列表 | 第79-80页 |
| 附录2 PcPMK基因序列结构 | 第80-82页 |
| 附录3 本研究中所使用培养基、试剂配方 | 第82-86页 |
| 附录4 PcPMK蛋白表达与纯化优化过程SDS-PAGE | 第86-88页 |
| 附录5 攻读硕士学位期间主要学术成果 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89页 |
